
அனைத்து iLive உள்ளடக்கம் மருத்துவ ரீதியாக மதிப்பாய்வு செய்யப்படும் அல்லது முடிந்தவரை உண்மையான துல்லியத்தை உறுதி செய்ய உண்மையில் சரிபார்க்கப்படுகிறது.
நாம் கடுமையான ஆதார வழிகாட்டுதல்களை கொண்டிருக்கிறோம் மற்றும் மரியாதைக்குரிய ஊடக தளங்கள், கல்வி ஆராய்ச்சி நிறுவனங்கள் மற்றும் சாத்தியமான போதெல்லாம், மருத்துவ ரீதியாக மதிப்பாய்வு செய்யப்பட்ட படிப்புகளை மட்டுமே இணைக்கிறோம். அடைப்புக்களில் உள்ள எண்கள் ([1], [2], முதலியன) இந்த ஆய்வுகள் தொடர்பான கிளிக் செய்யக்கூடியவை என்பதை நினைவில் கொள்க.
எங்கள் உள்ளடக்கத்தில் எதையாவது தவறாக, காலதாமதமாக அல்லது சந்தேகத்திற்குரியதாகக் கருதினால், தயவுசெய்து அதைத் தேர்ந்தெடுத்து Ctrl + Enter ஐ அழுத்தவும்.
காசநோயை ஆய்வக நோயறிதல்
கட்டுரை மருத்துவ நிபுணர்
கடைசியாக மதிப்பாய்வு செய்யப்பட்டது: 05.07.2025
மருத்துவ இரத்த பரிசோதனை
காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளில், பொது இரத்த பரிசோதனையில் ஏற்படும் மாற்றங்கள் நோய்க்குறியியல் அல்ல. காசநோயின் வரையறுக்கப்பட்ட மற்றும் குறைந்த செயல்பாட்டு வடிவங்களில், சாதாரண எண்ணிக்கையிலான எரித்ரோசைட்டுகளின் ஹைபோக்ரோமியா சிறப்பியல்பு. பாரிய ஊடுருவல்கள் அல்லது கேசியஸ் நிமோனியாவில், பரவலான கேசியஸ் லிம்பேடினிடிஸ், குறிப்பிட்ட குடல் சேதம், அத்துடன் பெரிய நுரையீரல் அல்லது அறுவை சிகிச்சைக்குப் பின் ஏற்படும் இரத்தக்கசிவுகள், எரித்ரோபீனியா மற்றும் மைக்ரோசைட்டோசிஸ், ஒலிகோக்ரோமாசியா, பாலிக்ரோமாசியா ஆகியவை குறிப்பிடப்படுகின்றன. மேக்ரோசைட்டோசிஸ், குறிப்பாக போய்கிலோசைட்டோசிஸ், பொதுவாக கடுமையான இரத்த சோகையுடன், மிகக் குறைவாகவே காணப்படுகின்றன. காசநோயின் ஈடுசெய்யப்பட்ட கட்டத்தில் ரெட்டிகுலோசைட்டுகளின் எண்ணிக்கை 0.1 முதல் 0.6% வரை மாறுபடும், துணை ஈடுசெய்யப்பட்ட கட்டத்தில் - 0.6 முதல் 1.0% வரை, மற்றும் சிதைக்கப்பட்ட நிலைக்கு, 1% ரெட்டிகுலோசைட்டுகள் சிறப்பியல்பு.
காசநோயின் சில சந்தர்ப்பங்களில், மிதமான லுகோசைடோசிஸ் (15 ஆயிரம் லுகோசைட்டுகள் வரை) காணப்படலாம், குறைவாக அடிக்கடி லுகோபீனியா, இது செயல்முறையின் வரையறுக்கப்பட்ட மற்றும் லேசான வடிவங்களைக் கொண்ட நோயாளிகளில் 2-7% வழக்குகளிலும், அழிவுகரமான மற்றும் முற்போக்கான நுரையீரல் காசநோயில் 12.5% வழக்குகளிலும் ஏற்படுகிறது.
பெரும்பாலும், லுகோசைட் சூத்திரத்தில் மாற்றங்கள் ஏற்படுகின்றன. உறவினர் மற்றும் முழுமையான நியூட்ரோபிலியா இரண்டும் குறிப்பிடப்பட்டுள்ளன, லுகோசைட் சூத்திரத்தில் இடதுபுறம் புரோமிலோசைட்டுகளுக்கு மிதமான மாற்றம். சிக்கலற்ற காசநோய் ஏற்பட்டால் மைலோசைட்டுகள் மிகவும் அரிதாகவே காணப்படுகின்றன. காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளியின் ஹீமோகிராமில் நோயியல் கிரானுலாரிட்டியுடன் கூடிய நியூட்ரோபில்களின் எண்ணிக்கையில் அதிகரிப்பு எப்போதும் செயல்முறையின் கால அளவைக் குறிக்கிறது: கடுமையான காசநோய் உள்ள நோயாளிகளில், கிட்டத்தட்ட அனைத்து நியூட்ரோபில்களும் நோயியல் கிரானுலாரிட்டியைக் கொண்டுள்ளன. காசநோய் வெடிப்பு குறையும் போது, அணுக்கரு மாற்றம் ஒப்பீட்டளவில் விரைவாக இயல்பு நிலைக்குத் திரும்பும். நியூட்ரோபில்களின் நோயியல் கிரானுலாரிட்டி பொதுவாக ஹீமோகிராமில் உள்ள மற்ற மாற்றங்களை விட நீண்ட காலம் நீடிக்கும்.
புற இரத்தத்தில் உள்ள ஈசினோபில்களின் உள்ளடக்கமும் செயல்முறையின் கட்டம் மற்றும் உயிரினத்தின் ஒவ்வாமை நிலையைப் பொறுத்து மாறுபடும். நோயின் கடுமையான மற்றும் நீடித்த வெடிப்புகளில் அவற்றின் எண்ணிக்கை அனியோசினோபிலியாவாகக் குறைகிறது, மாறாக, ஊடுருவல்கள் மற்றும் ப்ளூரல் எஃப்யூஷன் ஆகியவற்றின் மறுஉருவாக்கத்தின் போது அதிகரிக்கிறது, அதே போல் முதன்மை காசநோயின் ஆரம்ப வடிவங்களிலும்.
முதன்மை காசநோயின் பெரும்பாலான வடிவங்கள் லிம்போபீனியாவுடன் சேர்ந்துள்ளன, இது சில நேரங்களில் குறிப்பிட்ட மாற்றங்களின் வடுவுக்குப் பிறகும் பல ஆண்டுகளுக்குக் காணப்படுகிறது. கடுமையான கட்டத்தில் இரண்டாம் நிலை காசநோய், செயல்முறையின் தீவிரத்தைப் பொறுத்து, சாதாரண எண்ணிக்கையிலான லிம்போசைட்டுகள் அல்லது லிம்போபீனியாவுடன் சேர்ந்து கொள்ளலாம்.
காசநோய் செயல்முறையை மதிப்பிடுவதற்கான சோதனைகளில், எரித்ரோசைட் வண்டல் வீதத்தை (ESR) தீர்மானிப்பதன் மூலம் ஒரு சிறப்பு இடம் ஆக்கிரமிக்கப்பட்டுள்ளது, இது காசநோய் செயல்முறையின் போக்கை மதிப்பிடுவதிலும் அதன் செயலில் உள்ள வடிவங்களை அடையாளம் காண்பதிலும் முக்கியமானது. ESR இன் அதிகரிப்பு ஒரு நோயியல் செயல்முறையின் இருப்பைக் குறிக்கிறது (தொற்று மற்றும் அழற்சி, சீழ் மிக்க, செப்டிக், ஹீமோபிளாஸ்டோசிஸ், லிம்போகிரானுலோமாடோசிஸ், முதலியன) மற்றும் அதன் தீவிரத்தின் குறிகாட்டியாக செயல்படுகிறது, ஆனால் சாதாரண ESR மதிப்புகள் எப்போதும் நோயியல் இல்லாததைக் குறிக்காது. இரத்தத்தில் குளோபுலின்கள், ஃபைப்ரினோஜென், கொழுப்பு ஆகியவற்றின் உள்ளடக்கம் அதிகரிப்பதாலும், இரத்த பாகுத்தன்மை குறைவதாலும் எரித்ரோசைட் வண்டல் முடுக்கம் எளிதாக்கப்படுகிறது. எரித்ரோசைட் வண்டல் வீதத்தை மெதுவாக்குவது ஹீமோகான்சென்ட்ரேஷன், அல்புமின்கள் மற்றும் பித்த அமிலங்களின் உள்ளடக்கத்தில் அதிகரிப்பு ஆகியவற்றுடன் கூடிய நிலைமைகளின் சிறப்பியல்பு.
சிகிச்சையின் போது காசநோய் நோயாளிகளின் ஹீமோகிராம் மாறுகிறது. சிகிச்சை தலையீடு எவ்வளவு வெற்றிகரமாக இருக்கிறதோ, அவ்வளவு வேகமாக ஹீமாட்டாலஜிக்கல் மாற்றங்கள் மறைந்துவிடும். அதே நேரத்தில், பல்வேறு பாக்டீரியா எதிர்ப்பு மருந்துகளின் ஹீமாடோபாய்சிஸின் விளைவை மனதில் கொள்ள வேண்டும். அவை பெரும்பாலும் ஈசினோபிலியாவை ஏற்படுத்துகின்றன, சில சந்தர்ப்பங்களில் - லுகோசைடோசிஸ், மற்றும் பெரும்பாலும் அக்ரானுலோசைட்டோசிஸ் மற்றும் லிம்பாய்டு-ரெட்டிகுலர் எதிர்வினை வரை லுகோபீனியா. நோயாளியின் மருத்துவ நிலை, செயல்முறையின் இயக்கவியல் மற்றும் சிகிச்சையின் செயல்திறனை மதிப்பிடுவதற்கு முறையான ஹீமாட்டாலஜிக்கல் கண்காணிப்பு மற்றும் பெறப்பட்ட தரவுகளின் சரியான பகுப்பாய்வு அவசியம்.
[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]
மருத்துவ சிறுநீர் பகுப்பாய்வு
சிறுநீர் பாதை காசநோய் ஏற்பட்டால், சிறுநீர் பகுப்பாய்வு முக்கிய ஆய்வக நோயறிதல் முறையாகும். லுகோசைட்டூரியா, எரித்ரோசைட்டூரியா, புரோட்டினூரியா, ஹைப்போஐசோஸ்தெனூரியா, காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியூரியா, குறிப்பிட்ட அல்லாத பாக்டீரியூரியா ஆகியவற்றைக் காணலாம்.
குறிப்பிட்ட கீமோதெரபிக்கு முன் சிறுநீர் பாதை காசநோயின் மிகவும் பொதுவான அறிகுறி லுகோசைட்டூரியா ஆகும், மேலும் இது விதிவிலக்கான சந்தர்ப்பங்களில் மட்டுமே இருக்காது, எடுத்துக்காட்டாக, சிறுநீர்க்குழாய் லுமினை முழுமையாக அழிப்பது. நெச்சிபோரென்கோவின் சோதனை (1 மில்லி சிறுநீரில் உள்ள லுகோசைட்டுகளின் எண்ணிக்கையை தீர்மானித்தல்) நெஃப்ரோகாசநோயில் லுகோசைட்டூரியாவின் அளவை மிகவும் புறநிலையாக மதிப்பிட உதவுகிறது, மேலும் சில சந்தர்ப்பங்களில் சாதாரண பொது சிறுநீர் பகுப்பாய்வு மூலம் அதைக் கண்டறிய உதவுகிறது. இருப்பினும், கடுமையான மற்றும் நாள்பட்ட பைலோனெப்ரிடிஸ், சிஸ்டிடிஸ், யூரித்ரிடிஸ், சிறுநீரக கற்கள் மற்றும் சிறுநீர்க்குழாய்களில் லுகோசைட்டூரியா ஏற்படலாம் என்பதை கணக்கில் எடுத்துக்கொள்ள வேண்டும்.
லுகோசைட்டூரியாவைப் போலவே எரித்ரோசைட்டூரியாவும் மரபணு காசநோயின் மிகவும் பொதுவான ஆய்வக அறிகுறிகளில் ஒன்றாகக் கருதப்படுகிறது. ஹெமாட்டூரியாவின் அதிர்வெண் செயல்முறையின் பரவலைப் பொறுத்தது; சிறுநீரகத்தில் அழிவுகரமான காசநோய் செயல்முறை உருவாகும்போது இது அதிகரிக்கிறது. லுகோசைட்டூரியா இல்லாத எரித்ரோசைட்டூரியா சிறுநீரக காசநோயின் ஆரம்ப கட்டங்களுக்கு மிகவும் பொதுவானது. லுகோசைட்டூரியாவை விட மேலோங்கிய ஹெமாட்டூரியா, சிறுநீரக காசநோயை குறிப்பிடப்படாத பைலோனெப்ரிடிஸிலிருந்து வேறுபடுத்தும்போது அதற்கு ஆதரவான ஒரு முக்கியமான வாதமாகும்.
[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ]
உயிர்வேதியியல் இரத்த பரிசோதனை
காசநோயில், சில உயிர்வேதியியல் குறியீடுகளில் ஏற்படும் மாற்றங்கள் முதன்மையாக செயல்முறையின் கட்டம், சிக்கல்கள் மற்றும் பல்வேறு இணக்க நோய்களைப் பொறுத்தது. நுரையீரல் மற்றும் பிற உறுப்புகளின் செயலற்ற காசநோய் உள்ள நோயாளிகளில், இரத்த சீரத்தின் மொத்த புரதம் மற்றும் புரதப் பகுதிகள் மாற்றப்படாது மற்றும் அவற்றின் இயல்பான உள்ளடக்கத்தை தீர்மானிக்கின்றன.
நோயின் கடுமையான வடிவங்களிலும், நாள்பட்ட காசநோய் வடிவங்களின் அதிகரிப்பு மற்றும் முன்னேற்றத்திலும், அல்புமின்-குளோபுலின் குணகம் குறைகிறது.
காசநோய் மற்றும் அதன் சிக்கல்களில் கல்லீரலுக்கு செயல்பாட்டு நிலை மற்றும் கரிம சேதத்தை மதிப்பிடுவதில் குறிப்பிடத்தக்க முக்கியத்துவம் வாய்ந்தது, இரத்த சீரத்தில் நேரடி மற்றும் மொத்த பிலிரூபின், அஸ்பார்டேட் அமினோட்ரான்ஸ்ஃபெரேஸ் (AST), அலனைன் அமினோட்ரான்ஸ்ஃபெரேஸ் (ALT) ஆகியவற்றை தீர்மானிப்பதாகும். அமினோட்ரான்ஸ்ஃபெரேஸின் அளவை மாறும் வகையில் தீர்மானித்தல். காசநோய் நோயாளிகளுக்கு சிகிச்சையளிப்பதில் பிலிரூபின், குறிப்பாக அதன் கடுமையான வடிவங்களில், காசநோய் நோயாளிகளின் உயிர்வேதியியல் பரிசோதனையின் ஒரு கட்டாய அங்கமாகும், மேலும் இது மாதந்தோறும் மேற்கொள்ளப்படுகிறது.
சிறுநீரகங்களின் செயல்பாட்டு நிலையை மதிப்பிடுவதில் காக்ராஃப்ட்-கால்ட் சூத்திரத்தைப் பயன்படுத்தி சீரம் கிரியேட்டினினை நிர்ணயித்தல் மற்றும் குளோமருலர் வடிகட்டுதல் வீதத்தைக் கணக்கிடுதல் ஆகியவை அடங்கும். ரெபெர்க் சோதனையைப் பயன்படுத்தி குளோமருலர் வடிகட்டுதல் வீதத்தைக் கணக்கிடுவது குறைவான துல்லியமான முடிவுகளைத் தருகிறது.
காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளின் மாறும் உயிர்வேதியியல் ஆய்வுகளின் முக்கிய குறிக்கோள், செயல்முறையின் போக்கைக் கண்காணித்தல், மருந்துகளின் பக்க விளைவுகளை சரியான நேரத்தில் கண்டறிதல் மற்றும் வளர்ந்து வரும் ஹோமியோஸ்டாஸிஸ் கோளாறுகளை போதுமான அளவு சரிசெய்தல் ஆகும்.
நுரையீரல் காசநோய்க்கு உயிர்வேதியியல் ஆராய்ச்சி முறைகளின் பயன்பாடு.
உயிரியல் திரவங்களில் உள்ள காசநோய் அமிலத்தின் உள்ளடக்கம் மிகவும் தகவலறிந்த குறிகாட்டியாகக் கருதப்படுகிறது, இருப்பினும், அதன் உறுதிப்பாடு தொழில்நுட்ப சிக்கல்களுடன் தொடர்புடையது (வாயு குரோமடோகிராபி மற்றும் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரியைப் பயன்படுத்த வேண்டிய அவசியம்).
இது அடினோசின் டீமினேஸின் செயல்பாட்டை அளவிடுவதற்கு நம்பிக்கைக்குரியது - திரவங்களில் தீர்மானிக்கப்படும் ஒரு நொதி: சினோவியல், பெரிகார்டியல், ஆஸ்கிடிக் அல்லது செரிப்ரோஸ்பைனல். அடினோசின் டீமினேஸின் முக்கிய உற்பத்தியாளர்கள் லிம்போசைட்டுகள் மற்றும் மோனோசைட்டுகள். உயிரியல் திரவங்களில் அடினோசின் டீமினேஸின் செயல்பாட்டைத் தீர்மானிப்பது காசநோய் சினோவிடிஸ், நிணநீர் முனைகளின் காசநோய், காசநோய் மூளைக்காய்ச்சல், காசநோய் செரோசிடிஸ் ஆகியவற்றைக் கண்டறிய உதவுகிறது.
சில உயிர்வேதியியல் குறிகாட்டிகள், அவற்றின் குறிப்பிட்ட தன்மை இல்லாததால், காயத்திற்கு அருகிலுள்ள உயிரியல் திரவங்களில் மட்டுமே தீர்மானிக்கப்படுகின்றன. டியூபர்குலினின் தோலடி அல்லது சருமத்திற்குள் செலுத்தப்படுவதற்கு பதிலளிக்கும் விதமாக குறிகாட்டிகளின் அளவு அளவிடப்படுகிறது (பொதுவாக நிர்வாகத்திற்கு முன் மற்றும் அதற்கு 48 மற்றும் 72 மணிநேரங்களுக்குப் பிறகு). இதற்குப் பிறகு, மார்க்கர் மட்டத்தில் (% இல்) அதிகரிப்பின் அளவு ஆரம்ப நிலை தொடர்பாக கணக்கிடப்படுகிறது.
உகந்ததாக, உறுப்பு சார்ந்த நொதி டிரான்ஸாமிடினேஸின் செயல்பாடு சிறுநீரில் தீர்மானிக்கப்படுகிறது; அதன் தோற்றம் பல்வேறு தோற்றங்களின் சிறுநீரக சேதத்தில் குறிப்பிடப்பட்டுள்ளது. உள்ளூர் அழற்சி செயல்முறையை அதிகரிக்க டியூபர்குலினை தோலடி முறையில் நிர்வகிக்கும் நிலைமைகளில் மட்டுமே டிரான்ஸாமிடினேஸின் ஆய்வு நியாயப்படுத்தப்படுகிறது. டிரான்ஸாமிடினேஸின் செயல்பாடு சிறுநீரில் ஆரம்பத்தில் மற்றும் 50 TE டியூபர்குலின் நிர்வாகத்திற்கு 24-72 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு தீர்மானிக்கப்படுகிறது. ஃபெர்மென்டூரியாவில் 2 மடங்கு அல்லது அதற்கு மேல் அதிகரிப்பு 82% வழக்குகளில் நாள்பட்ட பைலோனெப்ரிடிஸின் அதிகரிப்பிலிருந்து சிறுநீரகத்தின் செயலில் உள்ள காசநோயை வேறுபடுத்த அனுமதிக்கிறது.
பெண் பிறப்புறுப்பு உறுப்புகளின் காசநோய் ஏற்பட்டால், இரத்தத்தில் உள்ள ஹாப்டோகுளோபின் மற்றும் மாலோண்டியால்டிஹைட்டின் செறிவுகள் தூண்டுதல் டியூபர்குலின் சோதனையின் நிலைமைகளின் கீழ் தீர்மானிக்கப்படுகின்றன. டியூபர்குலின் 50 TE அளவில் தோலடி முறையில் நிர்வகிக்கப்படுகிறது மற்றும் 72 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு மீண்டும் மீண்டும் உயிர்வேதியியல் ஆய்வு செய்யப்படுகிறது. காசநோய் காரணவியல் இருந்தால், ஹாப்டோகுளோபின் அளவின் அதிகரிப்பின் அளவு குறைந்தது 28% ஆகும், மேலும் மாலோண்டியால்டிஹைட்டின் அளவு 39% அல்லது அதற்கு மேற்பட்டது. டக்ளஸ் பையில் இருந்து பெறப்பட்ட பெரிட்டோனியல் திரவத்தில் அடினோசின் டீமினேஸின் செயல்பாட்டைத் தீர்மானிப்பதும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. முன்புற வயிற்றுச் சுவரில் உள்ள உள் பிறப்புறுப்பு உறுப்புகளின் புரோஜெக்ஷன் பகுதியில் 0.1 TE மற்றும் 0.01 TE அளவுகளில் டியூபர்குலினின் இன்ட்ராடெர்மல் நிர்வாகம் செய்யப்பட்ட 72 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு பஞ்சர் மீண்டும் பரிசோதிக்கப்படுகிறது. ஆரம்ப மதிப்புடன் ஒப்பிடும்போது அடினோசின் டீமினேஸின் செயல்பாட்டில் 10% அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட அதிகரிப்பு டியூபர்குலிச செயல்முறையைக் குறிக்கிறது.
கண் பாதிப்பு ஏற்பட்டால், ஆன்டிஜென் தூண்டுதலுக்கு பதிலளிக்கும் விதமாக கண்ணில் ஏற்படும் குவிய எதிர்வினை ஆராயப்படுகிறது. இந்த வழக்கில், காட்சி செயல்பாடுகளில் குறைவுடன் கூர்மையாக வெளிப்படுத்தப்பட்ட எதிர்வினையின் வளர்ச்சி விரும்பத்தகாதது. குறைந்தபட்ச குவிய எதிர்வினைகளை மதிப்பிடுவது பெரும்பாலும் கடினமாக இருப்பதால், முடிவை புறநிலைப்படுத்த இரத்த சீரத்தில் ஹாப்டோகுளோபின் அல்லது அடினோசின் டீமினேஸின் அதிகரிப்பின் அளவிற்கு இணையாக கவனம் செலுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
அனைத்து உயிர்வேதியியல் ஆய்வுகளும் மற்ற முறைகளுடன் இணைந்து மேற்கொள்ளப்பட வேண்டும்.
[ 20 ], [ 21 ], [ 22 ], [ 23 ]
இரத்த உறைதல் அமைப்பு பற்றிய ஆய்வு
நுரையீரல் காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட பல நோயாளிகளுக்கு ஹீமோப்டிசிஸ் அல்லது நுரையீரல் இரத்தக்கசிவுகள் இருப்பதும், காசநோய்க்கான அறுவை சிகிச்சை சிகிச்சையில் ஹீமோகோகுலேஷன் சிக்கல்களும் இருப்பதால், ஃபிதிசியாலஜியில் இரத்த உறைதல் அமைப்பின் நிலையைப் படிப்பதன் பொருத்தப்பாடு ஏற்படுகிறது. கூடுதலாக, இயற்கையாகவே இணைந்த மறைந்திருக்கும் இன்ட்ராவாஸ்குலர் ஹீமோகோகுலேஷன் நோயின் போக்கையும் கீமோதெரபியின் செயல்திறனையும் பாதிக்கிறது.
வீக்கத்தின் முக்கிய எக்ஸுடேடிவ் கூறுகளைக் கொண்ட நுரையீரல் காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளில், இரத்தத்தின் ஆன்டிகோகுலண்ட் செயல்பாட்டில் குறைவு காணப்படுகிறது. வீக்கத்தின் முக்கிய உற்பத்தி கூறுகளைக் கொண்ட குறிப்பிட்ட நுரையீரல் சேதம் குறைவாக உள்ள நோயாளிகளில், இன்ட்ராவாஸ்குலர் ஹீமோகோகுலேஷன் மிகக் குறைவாகவே வெளிப்படுத்தப்படுகிறது. ஹீமோப்டிசிஸ் மற்றும் நுரையீரல் இரத்தக்கசிவுகளுடன் நுரையீரல் காசநோய் உள்ள நோயாளிகளில், இரத்த உறைதல் அமைப்பின் நிலை வேறுபட்டது: ஹீமோப்டோயாவின் உச்சத்தில் அல்லது அது நிறுத்தப்பட்ட உடனேயே, இரத்த உறைதல் செயல்முறைகளின் உச்சரிக்கப்படும் தீவிரம் காரணமாக இரத்த உறைதல் திறனில் கூர்மையான அதிகரிப்பு காணப்படுகிறது, அதே நேரத்தில் அதிகரித்த "கட்டமைப்பு" உறைதலை பராமரிக்கிறது. பாரிய இரத்த இழப்பு உள்ள நோயாளிகளில், ஃபைப்ரினோஜென் செறிவு, காரணி XIII செயல்பாடு மற்றும் பிளேட்லெட் எண்ணிக்கை குறைவதால் உறைதல் திறனில் குறைவு காணப்படுகிறது. நுரையீரல் காசநோயின் வரையறுக்கப்பட்ட வடிவங்களைக் கொண்ட நோயாளிகளுக்கு அறுவை சிகிச்சை சிகிச்சையின் கட்டத்தில், ஹோமியோஸ்டாஸிஸ் அமைப்பில் குறிப்பிடத்தக்க தொந்தரவுகள் ஏற்படாது. பரவலான செயல்முறைகளைக் கொண்ட நோயாளிகளில், நிமோனெக்டோமி அல்லது ப்ளூரோப்நியூமோனெக்டோமியைச் செய்யும்போது, டிஐசி நோய்க்குறி பெரும்பாலும் உருவாகிறது, இது "இரண்டாவது நோய்" வடிவத்தை எடுக்கலாம்.
நுரையீரல் காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளில் இரத்த உறைதல் அமைப்பின் நிலையை கண்காணிக்க, செயல்படுத்தப்பட்ட பகுதி த்ரோம்போபிளாஸ்டின் நேரம் (APTT), ஃபைப்ரினோஜென், த்ரோம்பின் நேரம், புரோத்ராம்பின் குறியீடு, அத்துடன் இரத்தப்போக்கு நேரம் மற்றும் இரத்த உறைதல் நேரம் ஆகியவற்றை தீர்மானிக்க வேண்டியது அவசியம்.
[ 24 ], [ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ]
ஹார்மோன் ஆய்வுகள்
நவீன பரிசோதனை மற்றும் மருத்துவ அவதானிப்புகள் நுரையீரலின் குறிப்பிட்ட காசநோய் வீக்கத்தில் ஹார்மோன் நிலையில் மாற்றங்கள் இருப்பதைக் குறிக்கின்றன. பிட்யூட்டரி-அட்ரீனல், பிட்யூட்டரி-தைராய்டு அமைப்புகள் மற்றும் கணைய செயல்பாட்டின் செயலிழப்பை சரிசெய்தல், காசநோய் எதிர்ப்பு சிகிச்சையுடன் இணைந்து, குறிப்பிட்ட வீக்கத்தின் மையத்தில் ஃபைப்ரோஜெனெசிஸ் மற்றும் பழுதுபார்க்கும் செயல்முறைகளை செயல்படுத்துவதற்கு பங்களிக்கிறது என்பது நிரூபிக்கப்பட்டுள்ளது.
பிட்யூட்டரி-தைராய்டு அமைப்பின் செயல்பாட்டு நிலை, இரத்த சீரத்தில் உள்ள ட்ரையோடோதைரோனைன் (T3), தைராக்ஸின் (T4) மற்றும் பிட்யூட்டரி தைராய்டு-தூண்டுதல் ஹார்மோன் (TSH) ஆகியவற்றின் உள்ளடக்கத்தால் தீர்மானிக்கப்படுகிறது .நுரையீரல் காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட 38-45% நோயாளிகளில் சப்ளினிக்கல் ஹைப்போ தைராய்டிசம் கண்டறியப்படுவதாக நிறுவப்பட்டுள்ளது, மேலும் இது பெரும்பாலும் பரவிய மற்றும் நார்ச்சத்து-கேவர்னஸ் வடிவ செயல்முறைகளில் கண்டறியப்படுகிறது. இந்த வடிவங்களில், T3 மற்றும் T4 இரண்டின் அளவுகளும் மிகவும் கூர்மையாகக் குறைக்கப்படுகின்றன , மேலும் இந்த ஹார்மோன்களின் ஏற்றத்தாழ்வு T4/ T3 விகிதத்தில் அதிகரிப்பு வடிவத்தில் ஏற்படுகிறது.
அட்ரீனல் கோர்டெக்ஸின் செயல்பாடு சீரம் கார்டிசோல் அளவால் மதிப்பிடப்படுகிறது, மேலும் கணையத்தின் நாளமில்லா சுரப்பி செயல்பாடு நோயெதிர்ப்பு சக்தி கொண்ட இன்சுலின் செறிவால் மதிப்பிடப்படுகிறது. ஒரு தொற்று நோயின் கடுமையான கட்டத்தில், எண்டோஜெனஸ் கார்டிசோல் மற்றும் இன்சுலின் தேவை அதிகரிக்கிறது. ஹைப்பர் இன்சுலினீமியா உடல் திசுக்களின் இன்சுலின் எதிர்ப்பையும் குறிக்கிறது, இது எந்தவொரு செயலில் உள்ள அழற்சி செயல்முறைக்கும், குறிப்பாக ஒரு குறிப்பிட்ட ஒன்றுக்கும் பொதுவானது. செயலில் உள்ள நுரையீரல் காசநோயில் அட்ரீனல் சுரப்பிகளின் குளுக்கோகார்டிகாய்டு செயல்பாட்டை தீர்மானிப்பது பெரும்பாலான நோயாளிகளில் ஹைப்பர் கார்டிசிசம் இருப்பதைக் கண்டறிய அனுமதிக்கிறது. கடுமையான காலகட்டத்தில் தொற்று அழற்சி உள்ள நோயாளியின் சாதாரண இரத்த கார்டிசோல் செறிவுகள் அட்ரீனல் கோர்டெக்ஸின் குளுக்கோகார்டிகாய்டு செயல்பாட்டின் ஒப்பீட்டு பற்றாக்குறையாகக் கருதப்பட வேண்டும், இது போதுமான அளவு குளுக்கோகார்டிகாய்டுகளுடன் மாற்று சிகிச்சைக்கு அடிப்படையாக செயல்படும்.
நுரையீரல் காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளில் கிட்டத்தட்ட மூன்றில் ஒரு பகுதியினர் இன்சுலினீமியாவின் குறைந்த அளவைக் கொண்டுள்ளனர், அதே நேரத்தில் 13-20% பேர் குறிப்பிடத்தக்க ஹைப்பர் இன்சுலினிசத்தைக் கொண்டுள்ளனர். மாறுபட்ட தீவிரத்தன்மை கொண்ட கார்போஹைட்ரேட் வளர்சிதை மாற்றக் கோளாறுகளின் வளர்ச்சிக்கு ஒப்பீட்டளவில் ஹைப்போ- மற்றும் ஹைப்பர் இன்சுலினிசம் இரண்டும் அதிக ஆபத்து காரணிகளாகும். கணைய பி-செல்களின் செயல்பாட்டு செயல்பாட்டில் ஏற்படும் இந்த மாற்றங்களுக்கு காசநோய் உள்ள நோயாளிகளுக்கு வழக்கமான கிளைசீமியா கண்காணிப்பு மற்றும் நீரிழிவு நோயை சரியான நேரத்தில் தடுப்பது தேவைப்படுகிறது. கூடுதலாக, காசநோயின் சிக்கலான சிகிச்சையில் இன்சுலின் உடலியல் அளவுகளைப் பயன்படுத்துவதற்கான பொருத்தத்திற்கு இது கூடுதல் நியாயமாக செயல்படுகிறது.
பொதுவாக, தைராய்டு ஹார்மோன் அளவுகளில் குறைவு, அவற்றின் ஏற்றத்தாழ்வு, ஹைபர்கார்டிசோலீமியா மற்றும் ஹைப்பர் இன்சுலினிசம் ஆகியவை காசநோய் செயல்முறையின் கடுமையான போக்கைக் கொண்ட நோயாளிகளில், விரிவான நுரையீரல் புண்கள் மற்றும் காசநோய் போதைப்பொருளின் உச்சரிக்கப்படும் அறிகுறிகளுடன் மிகவும் உச்சரிக்கப்படுகின்றன.
காசநோயின் நுண்ணுயிரியல் நோயறிதல்
காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளை அடையாளம் காணுதல், நோயறிதலைச் சரிபார்த்தல், கீமோதெரபியைக் கண்காணித்தல் மற்றும் சரிசெய்தல், சிகிச்சை விளைவுகளை மதிப்பிடுதல், வேறுவிதமாகக் கூறினால், காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளி பதிவு செய்யப்பட்ட தருணத்திலிருந்து பதிவேட்டில் இருந்து நீக்கப்படும் வரை நுண்ணுயிரியல் ஆய்வுகள் அவசியம்.
அனைத்து தொற்றுநோயியல் திட்டங்களும் திட்டங்களும் பாக்டீரியா வெளியேற்றிகளின் எண்ணிக்கையை மதிப்பிடுவதை அடிப்படையாகக் கொண்டவை, இது காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவைக் கண்டறிவதற்கான ஆய்வக முறைகளைப் பயன்படுத்தாமல் செய்ய முடியாது. ஒழுங்கமைக்கப்படாத மக்கள்தொகை என்று அழைக்கப்படுபவர்களின் முறையீட்டை ஆராயும்போது, u200bu200bபாக்டீரியா வெளியேற்றிகளின் சதவீதம் 70 அல்லது அதற்கு மேற்பட்டதை அடைகிறது, இது ஆய்வக முறைகளை இந்த மக்கள்தொகை குழுவில் காசநோய் நோயாளிகளை அடையாளம் காண மிகவும் பயனுள்ள வழிமுறையாக ஆக்குகிறது.
காசநோயைக் கண்டறிவதற்கான பாரம்பரிய நுண்ணுயிரியல் முறைகள் பாக்டீரியோஸ்கோபிக் மற்றும் கலாச்சார ஆய்வுகள் ஆகும். நவீன முறைகளில் தானியங்கி அமைப்புகள் மற்றும் PCR இல் காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவை வளர்ப்பது அடங்கும். இருப்பினும், இந்த முறைகள் அனைத்தும் அவசியம் கிளாசிக்கல் பாக்டீரியாவியல் முறைகளுடன் இணைக்கப்படுகின்றன.
கண்டறியும் பொருட்களின் சேகரிப்பு
ஆய்வக சோதனைகளின் செயல்திறன் பெரும்பாலும் கண்டறியும் பொருளின் தரத்தைப் பொறுத்தது. கண்டறியும் பொருளைச் சேகரித்தல், சேமித்தல் மற்றும் கொண்டு செல்வதற்கான விதிகளுக்கு இணங்குதல் மற்றும் நோயாளி பரிசோதனை வழிமுறையை துல்லியமாக செயல்படுத்துதல் ஆகியவை முடிவை நேரடியாகப் பாதிக்கிறது மற்றும் உயிரியல் பாதுகாப்பை உறுதி செய்கிறது.
காசநோயை பரிசோதிக்க பல்வேறு வகையான பொருட்கள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. நுரையீரல் காசநோய் மிகவும் பொதுவான காசநோய் தொற்று வடிவமாக இருப்பதால், சோதனைக்கான முக்கிய பொருள் சளி மற்றும் பிற வகையான மூச்சுக்குழாய் மர வெளியேற்றமாகக் கருதப்படுகிறது: ஏரோசல் உள்ளிழுத்தலுக்குப் பிறகு பெறப்பட்ட மேல் சுவாசக்குழாய் வெளியேற்றம்: மூச்சுக்குழாய் கழுவும் நீர்; மூச்சுக்குழாய் கழுவும் நீர்; மூச்சுக்குழாய் ஸ்கோபி, டிரான்ஸ்ட்ராஷியல் மற்றும் இன்ட்ராபுல்மோனரி பயாப்ஸியின் போது பெறப்பட்ட பொருள்: மூச்சுக்குழாய் ஆஸ்பிரேட், குரல்வளை ஸ்மியர்ஸ், எக்ஸுடேட்ஸ், காயம் ஸ்மியர்ஸ் போன்றவை.
நோயாளியிடமிருந்து கட்டுப்படுத்தப்பட்ட பொருட்களை சேகரித்தல் மேற்கொள்ளப்பட்டால் ஆராய்ச்சியின் செயல்திறன் அதிகரிக்கும். இதற்காக, சிறப்பாக பொருத்தப்பட்ட அறை ஒதுக்கப்படுகிறது அல்லது சிறப்பு சாவடிகள் வாங்கப்படுகின்றன. பொருட்களை சேகரிப்பது ஒரு ஆபத்தான செயல்முறையாகும், எனவே, தொற்று பாதுகாப்பு விதிகளுக்கு இணங்க ஆராய்ச்சிக்கான பொருட்களை சேகரிக்க வேண்டும்.
மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோய்க்கான பரிசோதனைக்கான பொருள், சுற்றுச்சூழல் மாசுபடுவதைத் தடுக்கவும், சேகரிக்கப்பட்ட பொருளை மாசுபடாமல் பாதுகாக்கவும் இறுக்கமாக திருகப்பட்ட மூடிகளுடன் கூடிய மலட்டு குப்பிகளில் சேகரிக்கப்படுகிறது.
கண்டறியும் பொருட்களை சேகரிப்பதற்கான குப்பிகள் பின்வரும் தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய வேண்டும்:
- தாக்கத்தை எதிர்க்கும் பொருளால் செய்யப்பட வேண்டும்;
- ஆட்டோகிளேவ் செய்யும்போது எளிதில் உருக வேண்டும்;
- போதுமான அளவு (40-50 மிலி) இருக்க வேண்டும்:
- சளியை சேகரிப்பதற்கான பரந்த திறப்பு (விட்டம் 30 மி.மீ க்கும் குறையாதது);
- கையாள எளிதாகவும், வெளிப்படையாகவும் அல்லது ஒளிஊடுருவக்கூடியதாகவும் இருக்க வேண்டும், இதனால் சேகரிக்கப்பட்ட மாதிரியின் அளவு மற்றும் தரத்தை மூடியைத் திறக்காமலேயே மதிப்பிட முடியும்.
உகந்த ஆராய்ச்சி முடிவுகளைப் பெற, பின்வரும் நிபந்தனைகளை பூர்த்தி செய்ய வேண்டும்:
- கீமோதெரபி தொடங்குவதற்கு முன்பு பொருள் சேகரிப்பு மேற்கொள்ளப்பட வேண்டும்;
- காலையில் சாப்பிடுவதற்கு அல்லது மருந்துகளை எடுத்துக்கொள்வதற்கு முன் ஆய்வுக்கான பொருள் சேகரிக்கப்பட வேண்டும்;
- இந்த ஆய்வுக்காக, குறைந்தது 3 காலை சளி மாதிரிகளை சேகரிப்பது நல்லது. தொடர்ந்து 3 நாட்களுக்கு சளி சேகரிக்கப்படுகிறது;
- சேகரிக்கப்பட்ட பொருள் விரைவில் ஆய்வகத்திற்கு வழங்கப்பட வேண்டும்:
- ஆய்வகத்திற்கு உடனடியாகப் பொருளை வழங்குவது சாத்தியமில்லாத சந்தர்ப்பங்களில், அது 4 °C காற்று வெப்பநிலையில் 48 மணி நேரத்திற்கு மேல் குளிர்சாதன பெட்டியில் சேமிக்கப்படும்;
- பொருளை கொண்டு செல்லும்போது, u200bu200bபாட்டில்களின் நேர்மைக்கு சிறப்பு கவனம் செலுத்த வேண்டியது அவசியம்.
சரியாக சேகரிக்கப்பட்ட சளி சளி அல்லது சளிச்சவ்வு தன்மையைக் கொண்டுள்ளது. பரிசோதிக்கப்பட்ட சளிப் பகுதியின் உகந்த அளவு 3-5 மில்லி ஆகும்.
ஒரு சுகாதார ஊழியரின் மேற்பார்வையின் கீழ் சளி சேகரிக்கப்படுகிறது. சளியை சேகரிப்பதற்கு பொறுப்பான நபர்கள் சில விதிகள் பின்பற்றப்படுவதை உறுதி செய்ய வேண்டும்:
- நோயாளிக்கு பரிசோதனையின் நோக்கம் மற்றும் உமிழ்நீர் அல்லது நாசோபார்னீஜியல் சளியை அல்ல, ஆனால் சுவாசக் குழாயின் ஆழமான பகுதிகளின் உள்ளடக்கங்களை இருமுவதன் அவசியத்தை விளக்குவது அவசியம். பல (2-3) ஆழமான சுவாசங்களுக்குப் பிறகு ஏற்படும் உற்பத்தி இருமலின் விளைவாக இதை அடைய முடியும். வாய்வழி குழியில் வளரும் மைக்ரோஃப்ளோராவின் முக்கிய பகுதியையும், சளி பரிசோதனையை சிக்கலாக்கும் உணவு குப்பைகளையும் அகற்ற, நோயாளி முதலில் வேகவைத்த தண்ணீரில் வாயைக் கழுவ வேண்டும் என்று எச்சரிக்க வேண்டியது அவசியம்;
- சளி சேகரிப்பில் ஈடுபடும் மருத்துவ பணியாளர், கவுன் மற்றும் தொப்பியுடன் கூடுதலாக, முகமூடி, ரப்பர் கையுறைகள் மற்றும் ரப்பர் ஏப்ரனை அணிய வேண்டும்;
- நோயாளியின் பின்னால் நின்று கொண்டு, பாட்டிலை முடிந்தவரை தனது உதடுகளுக்கு அருகில் பிடித்துக் கொள்ளவும், இருமும்போது உடனடியாக சளியை அதில் பிரிக்கவும் அறிவுறுத்தப்படுகிறார்கள், அதே நேரத்தில் காற்று ஓட்டம் சுகாதார ஊழியரிடமிருந்து விலகி இருப்பதை உறுதி செய்வது அவசியம்:
- சளி சேகரிப்பு முடிந்ததும், சுகாதார பணியாளர் பாட்டிலை மூடியுடன் கவனமாக மூடி, சேகரிக்கப்பட்ட சளியின் அளவு மற்றும் தரத்தை மதிப்பிட வேண்டும். பின்னர் பாட்டில் லேபிளிடப்பட்டு ஆய்வகத்திற்கு கொண்டு செல்ல ஒரு சிறப்பு பெட்டியில் வைக்கப்படுகிறது.
நோயாளிக்கு சளி சுரக்கவில்லை என்றால், அதற்கு முந்தைய இரவும், பொருள் சேகரிக்கும் நாளன்று அதிகாலையிலும், அவருக்கு ஒரு சளி நீக்கி மருந்தை வழங்க வேண்டும்: மார்ஷ்மெல்லோ வேர் சாறு (முகால்டின்), ப்ரோமெக்சின், அம்ப்ராக்ஸால் போன்றவை - அல்லது எரிச்சலூட்டும் உள்ளிழுக்கும் மருந்தைப் பயன்படுத்த வேண்டும், சளியை சேகரிக்க அறையில் நிறுவப்பட்ட உபகரணங்களைப் பயன்படுத்தி. இந்த வழியில் சேகரிக்கப்பட்ட பொருள் பாதுகாக்கப்படாது மற்றும் சேகரிக்கும் நாளில் பரிசோதிக்கப்பட வேண்டும். ஆய்வகத்தில் அதன் "நிராகரிப்பை" தவிர்க்க, பரிந்துரையில் ஒரு சிறப்பு குறிப்பு செய்யப்பட வேண்டும்.
ஒரு குறிப்பிட்ட நிறுவனத்தில் நுண்ணுயிரியல் ஆய்வுகள் செய்யப்படாவிட்டால், சேகரிக்கப்பட்ட நோயறிதல் பொருள் ஆய்வகத்திற்கு மையமாக வழங்கப்பட வேண்டும், மேலும் பொருள் குளிர்சாதன பெட்டியில் அல்லது விநியோகங்களுக்கு இடையில் பாதுகாப்புகளுடன் வைக்கப்பட வேண்டும். பொருள் எளிதில் கிருமி நீக்கம் செய்யக்கூடிய போக்குவரத்து பெட்டிகளில் ஆய்வகத்திற்கு வழங்கப்படுகிறது. ஒவ்வொரு மாதிரியும் பொருத்தமான லேபிளுடன் வழங்கப்பட வேண்டும், மேலும் முழு தொகுதியும் பூர்த்தி செய்யப்பட்ட படிவத்துடன் இருக்க வேண்டும்.
நோயாளிகளின் பரிசோதனை முறைகள் மற்றும் அதிர்வெண்
ஒரு நோயாளியின் காசநோய்க்கான ஆரம்ப, நோயறிதல் பரிசோதனை என்று அழைக்கப்படும் போது, 2 அல்லது 3 நாட்களுக்கு மருத்துவ பணியாளர்களின் மேற்பார்வையின் கீழ் சேகரிக்கப்பட்ட சளியின் குறைந்தது 3 பகுதிகளையாவது பரிசோதிப்பது அவசியம், இது நுண்ணோக்கியின் செயல்திறனை அதிகரிக்கிறது.
காசநோய்க்கான முதன்மை பரிசோதனையை சுகாதார அமைப்பின் அனைத்து மருத்துவ மற்றும் நோயறிதல் நிறுவனங்களும் மேற்கொள்ள வேண்டும். சமீபத்தில், முதன்மை பரிசோதனையின் செயல்திறனை அதிகரிப்பதற்காக, தொற்றுநோய் பாதுகாப்பை உறுதி செய்வதற்காக நவீன நுண்ணோக்கிகள் மற்றும் உபகரணங்களுடன் கூடிய மருத்துவ நோயறிதல் ஆய்வகங்களின் அடிப்படையில் நுண்ணோக்கி மையங்கள் என்று அழைக்கப்படுபவை ஏற்பாடு செய்யப்பட்டுள்ளன.
காசநோய் எதிர்ப்பு நிறுவனங்கள் ஒரு கணக்கெடுப்புத் திட்டத்தைப் பயன்படுத்துகின்றன, இது 3 நாட்களுக்குள் சளி அல்லது பிற நோயறிதல் பொருட்களை குறைந்தது 3 மடங்கு பரிசோதனை செய்ய வழங்குகிறது. சிகிச்சையின் போது, தீவிர கீமோதெரபி கட்டத்தில் குறைந்தபட்சம் ஒரு மாதத்திற்கு ஒரு முறையாவது நுண்ணுயிரியல் ஆய்வுகள் தொடர்ந்து மேற்கொள்ளப்படுகின்றன. பின்தொடர்தல் கட்டத்திற்கு நகரும்போது, ஆய்வுகள் குறைவாகவே மேற்கொள்ளப்படுகின்றன - 2-3 மாத இடைவெளியில், ஆய்வுகளின் அதிர்வெண் இரண்டாகக் குறைக்கப்படுகிறது.
நுரையீரல் காசநோய்க்கான நோயறிதல் பொருட்களை சேகரிப்பதன் அம்சங்கள்
காசநோயின் எக்ஸ்ட்ராபுல்மோனரி வடிவங்களில் உள்ள நோயியல் பொருளின் ஒரு அம்சம், அதில் மைக்கோபாக்டீரியா காசநோயின் குறைந்த செறிவு ஆகும், இதற்கு நுண்ணுயிரியல் ஆராய்ச்சியின் அதிக உணர்திறன் முறைகள் தேவைப்படுகின்றன, முதன்மையாக ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தில் விதைக்கும் முறைகள்.
பிறப்புறுப்பு காசநோய் ஏற்பட்டால், சிறுநீர் பரிசோதனைக்கு மிகவும் அணுகக்கூடிய பொருளாகும். சிறுநீர் சேகரிப்பு சிறப்புப் பயிற்சி பெற்ற செவிலியரால் செய்யப்பட வேண்டும்.
வெளிப்புற பிறப்புறுப்புகள் தண்ணீர் மற்றும் சோப்பு அல்லது பொட்டாசியம் பெர்மாங்கனேட்டின் பலவீனமான கரைசலால் கழுவப்படுகின்றன. சிறுநீர்க்குழாயின் வெளிப்புற திறப்பு கவனமாக சிகிச்சையளிக்கப்படுகிறது. காலை சிறுநீரின் நடுப்பகுதி ஒரு மலட்டு பாட்டிலில் சேகரிக்கப்படுகிறது: ஆண்களில் - இயற்கையாகவே, பெண்களில் - ஒரு வடிகுழாயைப் பயன்படுத்தி. சிறுநீரக இடுப்பிலிருந்து சிறுநீர் ஒன்று அல்லது இரண்டு சிறுநீரகங்களின் வடிகுழாய்மயமாக்கலின் போது மலட்டு சோதனைக் குழாய்களில் சேகரிக்கப்படுகிறது, பிந்தைய வழக்கில் - ஒவ்வொரு சிறுநீரகத்திலிருந்தும் தனித்தனியாக. இந்த சிறுநீரில் ஒரு சிறிய அளவு மையவிலக்கு செய்யப்படுகிறது, வண்டல் ஆராயப்படுகிறது.
ஆண்களில், விந்து, டெஸ்டிகுலர் பஞ்சர்கள் மற்றும் புரோஸ்டேட் சுரப்புகள் ஒரு வண்டலைப் பெற மையவிலக்கு செய்யப்படுகின்றன. ஆண்களில் பிறப்புறுப்பு பகுதியில் ஒரு குறிப்பிட்ட செயல்முறையின் எந்தவொரு உள்ளூர்மயமாக்கலுடனும், புரோஸ்டேட் மசாஜ் காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவைக் கொண்ட சுரப்புகளின் வெளியீட்டை ஊக்குவிக்கும்.
பெண்களிடமிருந்து மாதவிடாய் இரத்தம் உறிஞ்சுதல் அல்லது காஃப்கா தொப்பியைப் பயன்படுத்தி சேகரிக்கப்படுகிறது. இதன் விளைவாக வரும் பொருள் காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் கழுவி, பின்னர் மையவிலக்கு செய்வதன் மூலம் எரித்ரோசைட்டுகளிலிருந்து விடுவிக்கப்படுகிறது. வண்டல் ஆய்வு செய்யப்படுகிறது.
கருப்பையின் கர்ப்பப்பை வாய் கால்வாயிலிருந்து வெளியேற்றம் ஏதேனும் ஒரு கொள்கலனில் அல்லது காஃப்கா தொப்பியில் சேகரிக்கப்படுகிறது, அதாவது, 1-2 மில்லி நோயியல் பொருளைக் குவிப்பது விரும்பத்தக்கது.
சிறுநீரகங்கள், பிறப்புறுப்புகள், பயாப்ஸிகள், எண்டோமெட்ரியல் ஸ்கிராப்பிங்ஸ் ஆகியவற்றில் அறுவை சிகிச்சை தலையீடுகளின் போது பெறப்பட்ட பொருள் ஒரே மாதிரியாக மாற்றப்படுகிறது. இதைச் செய்ய, இது ஒரு மலட்டு மோர்டாரில் வைக்கப்பட்டு, மலட்டு கத்தரிக்கோலால் நன்கு நசுக்கப்படுகிறது. மலட்டுத்தன்மையுள்ள நதி மணல் அதன் நிறைக்கு சமமான அளவில் விளைந்த சஸ்பென்ஷனில் சேர்க்கப்படுகிறது, பின்னர் 0.5-1.0 மில்லி ஐசோடோனிக் சோடியம் குளோரைடு கரைசல் சேர்க்கப்பட்டு, ஐசோடோனிக் சோடியம் குளோரைடு கரைசல் (4-5 மில்லி) சேர்த்து ஒரு மெல்லிய நிறை உருவாகும் வரை அனைத்தும் அரைக்கப்படுகிறது. பின்னர் நிறை 1-1.5 நிமிடங்கள் நிலைநிறுத்த அனுமதிக்கப்படுகிறது, சூப்பர்நேட்டண்ட் பரிசோதிக்கப்படுகிறது.
எலும்புகள் மற்றும் மூட்டுகளின் காசநோய். ஒரு மலட்டு சிரிஞ்ச் மூலம் பெறப்பட்ட துளை (சீழ் கட்டிகளிலிருந்து சீழ்) ஒரு மலட்டு கொள்கலனில் வைக்கப்பட்டு உடனடியாக ஆய்வகத்திற்கு வழங்கப்படுகிறது. முன்பு மலட்டு ஐசோடோனிக் சோடியம் குளோரைடு கரைசலில் ஈரப்படுத்தப்பட்ட ஒரு மலட்டு பைப்பெட்டைப் பயன்படுத்தி, 2-5 மில்லி சீழ் எடுக்கப்பட்டு, மணிகள் கொண்ட ஒரு பாட்டிலுக்கு மாற்றப்பட்டு, மேலும் 2-3 மில்லி ஐசோடோனிக் சோடியம் குளோரைடு கரைசல் சேர்க்கப்படுகிறது. பாட்டிலை ஒரு ஸ்டாப்பரால் மூடி, 8-10 நிமிடங்கள் ஷேக்கரில் அசைக்க வேண்டும். ஒரே மாதிரியான இடைநீக்கம் பரிசோதிக்கப்படுகிறது.
ஆஸ்டியோஆர்டிகுலர் காசநோயின் ஃபிஸ்துலஸ் வடிவங்களில், ஃபிஸ்துலாவிலிருந்து சீழ் எடுக்கப்படுகிறது. அதிக அளவு வெளியேற்றம் நேரடியாக ஒரு சோதனைக் குழாயில் சேகரிக்கப்படுகிறது. சீழ் குறைவாக வெளியேறும் சந்தர்ப்பங்களில், ஃபிஸ்துலா பாதை ஒரு மலட்டு ஐசோடோனிக் சோடியம் குளோரைடு கரைசலால் கழுவப்படுகிறது, மேலும் ஒரு சோதனைக் குழாயிலோ அல்லது சீழ் நனைத்த ஒரு டம்ளரிலோ சேகரிக்கப்பட்ட கழுவல்கள் பரிசோதனைக்கு அனுப்பப்படுகின்றன.
எலும்புகள் மற்றும் மூட்டுகளில் அறுவை சிகிச்சை தலையீடுகளின் போது பெறப்பட்ட அறுவை சிகிச்சைப் பொருட்களில் சீழ் மிக்க-நெக்ரோடிக் நிறைகள், துகள்கள், வடு திசு, எலும்பு திசு, சினோவியல் சவ்வு திசு மற்றும் பிற அடி மூலக்கூறுகள் இருக்கலாம். சிறுநீரக காசநோயைப் போலவே அதன் செயலாக்கமும் செய்யப்படுகிறது.
இரத்த உறைதலைத் தடுக்க, 3% சோடியம் சிட்ரேட் கரைசலில் (1:1 விகிதத்தில்) சைனோவியல் திரவத்தின் நுண்ணுயிரியல் பரிசோதனை, துளையிடப்பட்ட உடனேயே செய்யப்படுகிறது.
நிணநீர் முனைகளின் காசநோய். நிணநீர் முனைகளில் துளையிடும் போது எடுக்கப்படும் சீழ், சீழ்ப்பிடிப்புகளிலிருந்து சீழ் எடுப்பது போலவே பரிசோதிக்கப்படுகிறது. அறுவை சிகிச்சை தலையீடுகள் மற்றும் பயாப்ஸிகளின் போது பெறப்பட்ட நிணநீர் முனை திசுக்கள் மற்ற வகை காசநோய்களைப் போலவே பரிசோதிக்கப்படுகின்றன.
மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோய்க்கான மலம் பற்றிய ஆய்வு, நேர்மறையான முடிவுகள் கிட்டத்தட்ட முழுமையாக இல்லாததால் மிகவும் அரிதாகவே செய்யப்படுகிறது.
[ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ], [ 36 ]
மைக்கோபாக்டீரியாவின் நுண்ணோக்கி
ஸ்பூட்டம் நுண்ணோக்கி என்பது ஒப்பீட்டளவில் விரைவான, எளிமையான மற்றும் மலிவான முறையாகும், இது காசநோய் சந்தேகிக்கப்படும் அனைத்து நிகழ்வுகளிலும் பயன்படுத்தப்பட வேண்டும். கூடுதலாக, கீமோதெரபியின் செயல்திறனை மதிப்பிடுவதற்கும், கலாச்சார முடிவுகள் இல்லாத நிலையில் மீட்பு அல்லது சிகிச்சை தோல்வியை உறுதிப்படுத்துவதற்கும் இந்த ஆய்வு செய்யப்படுகிறது.
நுண்ணோக்கி பரிசோதனைக்கு இரண்டு முறைகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன:
- நேரடி நுண்ணோக்கி முறை, கண்டறியும் பொருளிலிருந்து நேரடியாக ஒரு ஸ்மியர் தயாரிக்கப்படும் போது;
- கலாச்சார ஆராய்ச்சிக்காக கிருமி நீக்கம் செய்யும் பொருட்களால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட பொருட்களிலிருந்து தயாரிக்கப்பட்ட வண்டல் நுண்ணோக்கி முறை.
நுண்ணிய ஆய்வுகள் மட்டுமே மேற்கொள்ளப்படும் ஆய்வகங்களில் முதல் முறை பயன்படுத்தப்படுகிறது (பொது மருத்துவ வலையமைப்பின் மருத்துவ நோயறிதல் ஆய்வகங்கள்).
நுண்ணோக்கி பரிசோதனையின் சிறந்த முடிவுகள், கண்டறியும் பொருளைக் குவிப்பதன் மூலம் பெறப்படுகின்றன (எடுத்துக்காட்டாக, மையவிலக்கு மூலம்).
நுண்ணோக்கி மூலம் 50% நிகழ்தகவுடன் மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயைக் கண்டறிய, 1 மில்லி சளியில் 5,000 க்கும் மேற்பட்ட நுண்ணுயிர் செல்கள் இருக்க வேண்டும். நுரையீரல் காசநோய் உள்ள நோயாளிகளின் சளியில் பொதுவாக கணிசமான எண்ணிக்கையிலான அமில-வேக பாக்டீரியாக்கள் உள்ளன, இது பாக்டீரியோஸ்கோபி மூலம் அவற்றை நம்பத்தகுந்த முறையில் கண்டறிய அனுமதிக்கிறது. ஒரு நோயாளியிடமிருந்து பல சளி மாதிரிகளை ஆராய்வதன் மூலம் இந்த முறையின் கண்டறியும் உணர்திறனை அதிகரிக்க முடியும். சில நோயாளிகளின் சளியில் நுண்ணோக்கி மூலம் கண்டறியக்கூடியதை விட குறைவான மைக்கோபாக்டீரியம் இருப்பதால், எதிர்மறையான பாக்டீரியோஸ்கோபிக் பரிசோதனை முடிவு காசநோயைக் கண்டறிவதை விலக்கவில்லை. சளி ஸ்மியர்களை மோசமாக தயாரிப்பதும் எதிர்மறையான பாக்டீரியோஸ்கோபிக் பரிசோதனை முடிவுக்கு காரணமாக இருக்கலாம்.
ஒரு ஸ்மியர் மூலம் அமில-வேக மைக்கோபாக்டீரியாவைக் கண்டறிவதற்கான மிகவும் பொதுவான முறை Ziehl-Neelsen staining ஆகும். இந்த முறை, மெழுகு-லிப்பிட் அடுக்கை உள்ளடக்கிய ஒரு சவ்வு வழியாக ஒரு நுண்ணுயிர் செல்லுக்குள் கார்போல் ஃபுச்சின் ஊடுருவுவதை அடிப்படையாகக் கொண்டது, அதே நேரத்தில் வெப்பமாக்கலின் விளைவு மற்றும் பீனாலின் வலுவான பொறித்தல் நடவடிக்கை ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளது. 25% சல்பூரிக் அமிலக் கரைசல் அல்லது 3% ஹைட்ரோகுளோரிக் ஆல்கஹால் மூலம் ஸ்மியர் நிறமாற்றம் செய்வது, அமில-வேகமற்ற அனைத்து கட்டமைப்புகளின் நிறமாற்றத்திற்கும் வழிவகுக்கிறது. ஸ்மியர் நிறமாற்றம் செய்யப்பட்ட கூறுகள் மெத்திலீன் நீலத்தின் 0.3% கரைசலுடன் கறை படிந்துள்ளன. மைக்கோபாக்டீரியா வழக்கமான அனிலின் சாயங்களை உணரவில்லை, இதன் விளைவாக அமில-வேக மைக்கோபாக்டீரியா ராஸ்பெர்ரி-சிவப்பு நிறத்தில் கறை படிந்துள்ளது, மேலும் பிற நுண்ணுயிரிகள் மற்றும் செல்லுலார் கூறுகள் நீல நிறத்தில் கறை படிந்துள்ளன.
ஜீல்-நீல்சனின் கூற்றுப்படி கறை படிந்த ஸ்மியர்களை ஆய்வு செய்ய, மூழ்கும் நோக்கத்துடன் (90- அல்லது 100-மடங்கு உருப்பெருக்கம்) ஒரு ஒளி பைனாகுலர் நுண்ணோக்கியையும், 7- அல்லது 10-மடங்கு உருப்பெருக்கம் கொண்ட ஒரு கண் பார்வையையும் பயன்படுத்தவும். 100 பார்வை புலங்கள் ஆய்வு செய்யப்படுகின்றன, இது ஸ்மியர்ஸில் ஒற்றை மைக்கோபாக்டீரியாவைக் கண்டறிய போதுமானது. அத்தகைய பரிசோதனையின் முடிவு எதிர்மறையாக இருந்தால், உறுதிப்படுத்தலுக்காக மேலும் 200 பார்வை புலங்களை ஆய்வு செய்ய பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. முடிவுகள் பதிவு செய்யப்படுகின்றன, இது அமில-வேக மைக்கோபாக்டீரியா (AFB) கண்டறியப்பட்ட எண்ணிக்கையைக் குறிக்கிறது.
இந்த முறைக்கு கூடுதலாக, ஒளிரும் நுண்ணோக்கிக்கு ஃப்ளோரோக்ரோம் சாயமிடுதல் பயன்படுத்தப்படுகிறது, இது சிறந்த முடிவுகளை அடைய அனுமதிக்கிறது. இந்த முறையின் பயன்பாடு நுண்ணோக்கியின் செயல்திறனை 10-15% அதிகரிக்கிறது. மைக்கோபாக்டீரியாவை ஒளிரும் சாயங்களுடன் (ஆரமைன், ரோடமைன், முதலியன) சிகிச்சையளிக்கும்போது, இந்த பொருட்கள் நுண்ணுயிர் செல்லின் மெழுகு போன்ற அமைப்புகளுடன் பிணைக்கின்றன. கறை படிந்த செல்கள் ஒரு அற்புதமான ஒளி மூலத்துடன் (புற ஊதா கதிர்வீச்சின் ஒரு குறிப்பிட்ட நிறமாலை) கதிர்வீச்சு செய்யப்படும்போது, அவை கருப்பு அல்லது அடர் பச்சை பின்னணியில் ஆரஞ்சு அல்லது பிரகாசமான சிவப்பு நிறத்தில் ஒளிரத் தொடங்குகின்றன. காணக்கூடிய படத்தின் அதிக பிரகாசம் மற்றும் மாறுபாடு காரணமாக, நுண்ணோக்கியின் ஒட்டுமொத்த உருப்பெருக்கத்தை 4-10 மடங்கு குறைக்கலாம், இது பார்வை புலத்தை விரிவுபடுத்துகிறது மற்றும் தயாரிப்பின் பார்வை நேரத்தைக் குறைக்கிறது. இதனுடன், புலத்தின் குறிப்பிடத்தக்க ஆழம் காரணமாக, ஆய்வின் வசதியை அதிகரிக்க முடியும்.
ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தும்போது, ஒரு ஸ்மியரின் அதே பகுதியைப் பார்ப்பது, ஜீல்-நீல்சனின் கூற்றுப்படி கறை படிந்த ஸ்மியர்களின் ஒளி நுண்ணோக்கியை விட கணிசமாகக் குறைவான நேரத்தை எடுக்கும். ஒரு நுண்ணோக்கி நிபுணர் ஒரு வேலை நாளில் தோராயமாக 20-25 அத்தகைய ஸ்மியர்களைப் பார்த்தால், ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியின் உதவியுடன் அவர் ஒரே நேரத்தில் 60-80 க்கும் மேற்பட்ட மாதிரிகளை ஆய்வு செய்யலாம். ஆரமைன் மற்றும் ரோடமைன் கலவையுடன் செல்களை சாயமிடுவது அமில-வேக மைக்கோபாக்டீரியாவுக்கு ஏதோ ஒரு வகையில் குறிப்பிட்டது என்பதை அனுபவம் வாய்ந்த நுண்ணோக்கி நிபுணர்கள் அறிவார்கள், இந்த விஷயத்தில் தங்கக் கம்பிகளின் தோற்றத்தைக் கொண்டிருக்கும். சப்ரோஃபைட்டுகள் பச்சை நிறத்தில் கறை படிந்திருக்கும்.
ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி முறையின் மற்றொரு முக்கியமான நன்மை என்னவென்றால், பல சாதகமற்ற காரணிகளின் செல்வாக்கின் கீழ், குறிப்பாக தீவிர கீமோதெரபியின் செல்வாக்கின் கீழ் அமில-எதிர்ப்பு பண்புகளை இழந்த மாற்றப்பட்ட மைக்கோபாக்டீரியாவைக் கண்டறியும் திறன் ஆகும், எனவே அவை ஜீல்-நீல்சன் கறை மூலம் கண்டறியப்படவில்லை.
ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி முறையின் தீமைகளில் நுண்ணோக்கியின் ஒப்பீட்டளவில் அதிக விலை மற்றும் அதன் செயல்பாடு ஆகியவை அடங்கும். இருப்பினும், மையப்படுத்தப்பட்ட அல்லது பிற பெரிய ஆய்வகங்களில், மூன்று வழக்கமான நுண்ணோக்கிகளுடன் பணிபுரியும் மூன்று ஆய்வக தொழில்நுட்ப வல்லுநர்களின் பணிச்சுமை விதிமுறையை மீறும் இடங்களில், அதற்கு பதிலாக ஒரு ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்துவது மலிவானது.
பாக்டீரியோஸ்கோபிக் முறைகள் மிகவும் உயர்ந்த விவரக்குறிப்பைக் கொண்டுள்ளன (89-100%). எந்தவொரு நுண்ணோக்கி முறையினாலும் பெறப்பட்ட நேர்மறையான முடிவுகளில் சுமார் 97% விதைப்பு முடிவுகளால் தெளிவாக உறுதிப்படுத்தப்படுகின்றன.
நோயியல் பொருளின் ஒரு ஸ்மியர் நுண்ணோக்கி பரிசோதனையானது கண்டறியப்பட்ட அமில-எதிர்ப்பு மைக்கோபாக்டீரியாவின் இனத்தை தீர்மானிக்க அனுமதிக்காது என்பதை கவனத்தில் கொள்ள வேண்டும். நுண்ணிய முறையானது, தயாரிப்பில் அமில-எதிர்ப்பு நுண்ணுயிரிகளின் இருப்பு அல்லது இல்லாமை பற்றி மட்டுமே ஒரு முடிவை எடுக்க அனுமதிக்கிறது, இது காசநோய் வளாகத்தின் மைக்கோபாக்டீரியாவைப் போலவே உருவவியல் ரீதியாக காசநோய் அல்லாத அமில-எதிர்ப்பு நுண்ணுயிரிகளின் அதிக எண்ணிக்கையிலான இயல்பில் இருப்பதன் மூலம் விளக்கப்படுகிறது.
நுண்ணோக்கி முடிவுகளின் மதிப்பீடு அரை அளவு அலகுகளில் செய்யப்படுகிறது.
வெவ்வேறு நுண்ணோக்கி முறைகளின் முடிவுகளை ஒப்பிட்டுப் பார்க்க, அனுபவ குணகங்கள் அறிமுகப்படுத்தப்படுகின்றன. எடுத்துக்காட்டாக, ஃப்ளோரசன்ட் சாயங்களால் கறை படிந்த ஒரு ஸ்மியர் முடிவுகளை ஒளி நுண்ணோக்கி ஆய்வின் (1000 மடங்கு உருப்பெருக்கம்) தரவுகளுடன் ஒப்பிட, ஃப்ளோரசன்ட் நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தி கண்டறியப்பட்ட அமில-வேக மைக்கோபாக்டீரியாக்களின் எண்ணிக்கையை தொடர்புடைய குணகத்தால் வகுக்க வேண்டியது அவசியம்: நுண்ணோக்கியின் 250 மடங்கு உருப்பெருக்கத்தில் - 10 ஆல், 450 மடங்கு - 4 ஆல், 630 மடங்கு - 2 ஆல்.
எக்ஸ்ட்ராபுல்மோனரி காசநோயில் நுண்ணோக்கியின் அம்சங்கள்
நேரடி நுண்ணோக்கி செய்யப்படுகிறது, அதே போல் ஜீல்-நீல்சன் அல்லது ஃப்ளோரசன்ட் சாயங்களின்படி செறிவூட்டலுக்குப் பிறகு தயாரிக்கப்பட்ட ஸ்மியர்களின் நுண்ணோக்கியும் செய்யப்படுகிறது. பொருளில் மைக்கோபாக்டீரியாவின் குறைந்த செறிவு காரணமாக ஸ்மியர்களின் நேரடி நுண்ணோக்கி பயனற்றது, எனவே செறிவூட்டல் முறைகளைப் பயன்படுத்துவது மிகவும் பகுத்தறிவு. மையவிலக்கு மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும். உயிரியல் பொருள் பிசுபிசுப்பாக இருந்தால், ஒரே நேரத்தில் ஒருமைப்படுத்தல் மற்றும் பொருளின் திரவமாக்கலுடன் மையவிலக்கு பயன்படுத்தப்படுகிறது, இது 3000 கிராம் மையவிலக்கு விசை மற்றும் ஹைபோகுளோரைட் கரைசல்களைக் கொண்ட அதிவேக மையவிலக்குகளைப் பயன்படுத்தி மேற்கொள்ளப்படுகிறது. உயிரியல் ரீதியாக ஆபத்தான ஏரோசோல்கள் உருவாகுவதால் மைக்ரோஃப்ளோட்டேஷன் போன்ற பிற செறிவூட்டல் முறைகள் தற்போது பயன்படுத்தப்படவில்லை.
[ 37 ]
காசநோயைக் கண்டறிவதற்கான கலாச்சார முறை
விதைப்பு முறை அல்லது வளர்ப்பு முறை, ஸ்மியர் நுண்ணோக்கியை விட அதிக உணர்திறன் கொண்டது மற்றும் பிந்தையதை விட பல நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது. இது பரிசோதிக்கப்படும் பொருளில் பல டஜன் சாத்தியமான மைக்கோபாக்டீரியாக்களைக் கண்டறிய அனுமதிக்கிறது மற்றும் அதிக நோயறிதல் மதிப்பைக் கொண்டுள்ளது. குறைந்த எண்ணிக்கையிலான மைக்கோபாக்டீரியாவை வெளியேற்றும் புதிதாக கண்டறியப்பட்ட அல்லது சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட நோயாளிகளிடமிருந்து பொருட்களை ஆய்வு செய்யும் போது இது மிகவும் முக்கியமானது.
நுண்ணோக்கியுடன் ஒப்பிடுகையில், கலாச்சார ஆராய்ச்சி கண்டறியப்பட்ட காசநோய் நோயாளிகளின் எண்ணிக்கையை 15-25% க்கும் அதிகமாக அதிகரிக்கவும், நோய் இன்னும் எளிதில் சிகிச்சையளிக்கக்கூடியதாக இருக்கும்போது, ஆரம்ப கட்டங்களில் காசநோயை சரிபார்க்கவும் அனுமதிக்கிறது. கலாச்சார ஆராய்ச்சியின் மிக முக்கியமான நன்மை, மருந்து உணர்திறன், வைரஸ் தன்மை மற்றும் பிற உயிரியல் பண்புகள் தொடர்பாக அடையாளம் காணப்பட்டு ஆய்வு செய்யக்கூடிய ஒரு நோய்க்கிருமி கலாச்சாரத்தைப் பெறுவதற்கான சாத்தியக்கூறு என்று கருதப்படுகிறது.
சாகுபடி முறைகளின் தீமைகள் அவற்றின் கால அளவு (பொருட்களுக்கான காத்திருப்பு காலம் 10 வாரங்களை அடைகிறது), அதிக விலை மற்றும் கண்டறியும் பொருளை செயலாக்குவதில் உள்ள சிக்கலான தன்மை ஆகியவை அடங்கும்.
நோயறிதல் பொருளின் விதைப்புக்கு முந்தைய சிகிச்சையின் கொள்கைகள்
காசநோய் பரிசோதனைகளை நடத்துவதற்கு வழக்கமான நுண்ணுயிரியல் முறைகளைப் பயன்படுத்த முடியாது. காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியா மிக மெதுவாக வளர்வதும், பெரும்பாலான மருத்துவ மாதிரிகளில் வேகமாக வளரும் பியோஜெனிக் மற்றும் அழுகும் நுண்ணுயிரிகள் மற்றும் பூஞ்சைகள் இருப்பதும் இதற்குக் காரணம். வளமான ஊட்டச்சத்து ஊடகங்களில் அவற்றின் விரைவான வளர்ச்சி மைக்கோபாக்டீரியாவின் வளர்ச்சியில் தலையிடுகிறது மற்றும் காசநோய் நோய்க்கிருமியை தனிமைப்படுத்த அனுமதிக்காது, எனவே விதைப்பதற்கு முன் கண்டறியும் பொருளை முன்கூட்டியே சிகிச்சையளிக்க வேண்டும். கூடுதலாக, நோயாளியின் சுவாசக் குழாயிலிருந்து வெளியாகும் மைக்கோபாக்டீரியா பொதுவாக அதிக அளவு சளியால் சூழப்பட்டுள்ளது, இது அவற்றைக் குவிப்பதை கடினமாக்குகிறது. இது சம்பந்தமாக, சளி மற்றும் பிற ஒத்த பொருட்களை விதைப்பதற்கு முன், அவை திரவமாக்கப்பட்டு கிருமி நீக்கம் செய்யப்பட வேண்டும்.
அனைத்து சவர்க்காரங்களும் கிருமிநாசினிகளும் மைக்கோபாக்டீரியாவில் அதிகமாகவோ அல்லது குறைவாகவோ உச்சரிக்கப்படும் நச்சு விளைவைக் கொண்டுள்ளன. சிகிச்சையின் விளைவாக, 90% வரை மைக்கோபாக்டீரியா இறக்கக்கூடும். மைக்கோபாக்டீரியல் மக்கள்தொகையில் போதுமான பகுதியைப் பாதுகாக்க, ஒருபுறம், வேகமாக வளர்ந்து வரும் பியோஜெனிக் மற்றும் அழுகும் நுண்ணுயிரிகளை அடக்கவும், மறுபுறம், பொருளில் இருக்கும் மைக்கோபாக்டீரியாவின் நம்பகத்தன்மையை அதிகபட்சமாகப் பாதுகாக்கவும் அனுமதிக்கும் மென்மையான சிகிச்சை முறைகளைப் பயன்படுத்துவது அவசியம்.
பொருள், அதன் ஒருமைப்பாடு மற்றும் மாசுபாட்டின் அளவைப் பொறுத்து, விதைப்பதற்கு முந்தைய சிகிச்சைக்கு பல்வேறு மாசுபடுத்திகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன: சளிக்கு - 4% சோடியம் ஹைட்ராக்சைடு கரைசல், 10% டிரைசோடியம் பாஸ்பேட் கரைசல்கள், பென்சல்கோனியம் குளோரைடு டிரைசோடியம் பாஸ்பேட், NALC-NaOH (N-அசிடைல்-எல்-சிஸ்டைன்-சோடியம் ஹைட்ராக்சைடு) இறுதி NaOH செறிவு 1% உடன், சிறுநீர் மற்றும் பிற திரவப் பொருட்களுக்கு - 3% சல்பூரிக் அமிலக் கரைசல், மாசுபட்ட மாதிரிகளுக்கு, கொழுப்பு கொண்ட பொருட்கள் - 5% வரை ஆக்சாலிக் அமிலக் கரைசல். கூடுதலாக, சில சந்தர்ப்பங்களில், நொதிகள் மற்றும் சர்பாக்டான்ட்கள் (சோப்பு) பயன்படுத்தப்படுகின்றன. ட்வீன் மற்றும் வேறு சில சவர்க்காரங்களின் பயன்பாடு மைக்கோபாக்டீரியல் செல்களின் குறைவான இறப்புடன் சேர்ந்துள்ளது (40-50% உயிர்வாழும்). இருப்பினும், அவை திரவப் பொருட்களுக்கு மட்டுமே பயன்படுத்தப்பட முடியும். கிட்களில் தயாரிக்கப்படும் NALC-NaOH, உலகில் மிகவும் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இந்த முறை மைக்கோபாக்டீரியல் செல் மக்கள்தொகையில் 85% க்கும் அதிகமானவற்றை தனிமைப்படுத்த அனுமதிக்கிறது. திசுக்களைக் கொண்ட திடப்பொருட்களை கிருமி நீக்கம் செய்வது மிகவும் கடினம், ஏனெனில் ஒரே மாதிரியாக மாற்றும்போது பொருளின் சிதறலின் அளவை யூகிப்பது கடினம். எடுத்துக்காட்டாக, நிணநீர் முனை பயாப்ஸிகளை செயலாக்குவது பெரும்பாலும் வெளிநாட்டு தாவரங்களுடன் மாசுபடுவதற்கான அதிகரித்த அதிர்வெண்ணுடன் சேர்ந்துள்ளது. இந்த வழக்கில், 1% எட்டோனியம் பயன்படுத்தப்படலாம்.
ஒரே மாதிரியானவை அல்லாத பொருட்கள், கிருமி நீக்கம் செய்யும் பொருட்களின் முன்னிலையில் கண்ணாடி மணிகளைப் பயன்படுத்தி ஒரே மாதிரியாக மாற்றப்படுகின்றன. திரவப் பொருட்கள் முன் மையவிலக்கு செய்யப்பட்டு, வண்டல் மட்டுமே பதப்படுத்தப்படுகிறது.
விதைப்பு மற்றும் அடைகாக்கும் நுட்பம்
பூர்வாங்க செயலாக்கத்திற்குப் பிறகு, பொருள் மையவிலக்கு செய்யப்படுகிறது, இது மைக்கோபாக்டீரியாவைத் துரிதப்படுத்துகிறது மற்றும் வண்டலில் அவற்றின் உள்ளடக்கத்தை அதிகரிக்கிறது ("வண்டல் செறிவூட்டல்"). இதன் விளைவாக வரும் வண்டல் நடுநிலையாக்கப்பட்டு அடர்த்தியான ஊட்டச்சத்து ஊடகம் அல்லது திரவ (அரை திரவ) ஊடகம் கொண்ட சோதனைக் குழாய்களின் மேற்பரப்பில் செலுத்தப்படுகிறது. மீதமுள்ள வண்டலில் இருந்து நுண்ணிய பரிசோதனைக்கான ஸ்மியர்ஸ் தயாரிக்கப்படுகின்றன. விதைப்பு நுட்பம் கண்டறியும் பொருளின் குறுக்கு-மாசுபாட்டைத் தடுக்க வேண்டும்.
நுண்ணுயிரியல் ஆராய்ச்சியின் முடிவுகளின் நம்பகமான மருத்துவ விளக்கத்திற்கு, பின்வரும் விதியைக் கடைப்பிடிக்க வேண்டும்: நுண்ணிய மற்றும் கலாச்சார ஆய்வுகள் ஒரே மாதிரியான கண்டறியும் பொருளிலிருந்து இணையாக மேற்கொள்ளப்பட வேண்டும்.
தடுப்பூசி போடப்பட்ட குழாய்கள் ஒரு தெர்மோஸ்டாட்டில் 37 ° C வெப்பநிலையில் 2 நாட்களுக்கு கிடைமட்ட நிலையில் வைக்கப்படுகின்றன. இது ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தில் பொருள் மிகவும் சீரான முறையில் உறிஞ்சப்படுவதை உறுதி செய்கிறது. 2 நாட்களுக்குப் பிறகு, குழாய்கள் செங்குத்து நிலைக்கு நகர்த்தப்பட்டு, விதைக்கப்பட்ட ஊடகம் உலர்த்தப்படுவதைத் தடுக்க ரப்பர் அல்லது சிலிகான் ஸ்டாப்பர்களால் காற்று புகாத வகையில் மூடப்படுகின்றன.
பயிர்கள் 37 ° C வெப்பநிலையில் 10-12 வாரங்களுக்கு வழக்கமான வாராந்திர ஆய்வுடன் தெர்மோஸ்டாட்டில் வைக்கப்படுகின்றன. ஒவ்வொரு கட்டுப்பாட்டு ஆய்விலும் பின்வரும் அளவுருக்கள் பதிவு செய்யப்படுகின்றன:
- விதைத்த நாளிலிருந்து பார்வைக்குக் காணக்கூடிய வளர்ச்சியின் காலம்;
- வளர்ச்சி விகிதம் (CFU எண்ணிக்கை);
- வெளிநாட்டு நுண்ணுயிர் தாவரங்கள் அல்லது பூஞ்சைகளால் கலாச்சாரத்தின் மாசுபாடு (அத்தகைய சோதனைக் குழாய்கள் அகற்றப்படுகின்றன);
- காணக்கூடிய வளர்ச்சி இல்லை. அடுத்த ஆய்வு வரை குழாய்கள் தெர்மோஸ்டாட்டில் விடப்படும்.
ஊட்டச்சத்து ஊடகம்
மைக்கோபாக்டீரியாவை வளர்க்க பல்வேறு ஊட்டச்சத்து ஊடகங்கள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன: திட, அரை திரவ, திரவ. இருப்பினும், அறியப்பட்ட ஊட்டச்சத்து ஊடகங்கள் எதுவும் அனைத்து மைக்கோபாக்டீரியல் செல்களின் வளர்ச்சியை உறுதி செய்யும் பண்புகளைக் கொண்டிருக்கவில்லை. இது சம்பந்தமாக, செயல்திறனை மேம்படுத்த, வெவ்வேறு கலவைகளின் 2-3 ஊட்டச்சத்து ஊடகங்களை ஒரே நேரத்தில் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
காசநோய் நோய்க்கிருமியின் முதன்மை தனிமைப்படுத்தலுக்கும் அதன் மருந்து உணர்திறனை தீர்மானிப்பதற்கும் ஒரு நிலையான ஊடகமாக, WHO லோவன்ஸ்டீன்-ஜென்சன் ஊடகத்தை பரிந்துரைக்கிறது. இது ஒரு அடர்த்தியான முட்டை ஊடகமாகும், இதில் பாக்டீரியோஸ்கோபிகல் நேர்மறை பொருளை விதைத்த 20-25 வது நாளில் மைக்கோபாக்டீரியா வளர்ச்சி பெறப்படுகிறது. பாக்டீரியோஸ்கோபிகல் எதிர்மறை பொருளை விதைப்பதற்கு நீண்ட அடைகாக்கும் காலம் (10-12 வாரங்கள் வரை) தேவைப்படுகிறது.
நம் நாட்டில், ER ஃபின் முன்மொழிந்த ஃபின்-II முட்டை ஊடகம் பரவலாகிவிட்டது. இது L-ஆஸ்பாரகினுக்குப் பதிலாக சோடியம் குளுட்டமேட்டைப் பயன்படுத்துகிறது என்பதில் வேறுபடுகிறது, இது மைக்கோபாக்டீரியாவில் அமினோ அமிலங்களின் தொகுப்புக்கான பிற பாதைகளைத் தூண்டுகிறது. இந்த ஊடகத்தில் வளர்ச்சி சற்று முன்னதாகவே தோன்றும், மேலும் மைக்கோபாக்டீரியா தனிமைப்படுத்தலின் அதிர்வெண் லோவன்ஸ்டீன்-ஜென்சன் ஊடகத்தை விட 6-8% அதிகமாகும்.
நுரையீரல் காசநோயின் பாக்டீரியாவியல் நோயறிதலின் செயல்திறனை அதிகரிக்க, ஊட்டச்சத்து ஊடகங்களின் தொகுப்பில் மாற்றியமைக்கப்பட்ட ஃபின்-II ஊடகத்தைச் சேர்ப்பது நல்லது. வளர்ச்சியை துரிதப்படுத்த, 0.05% சோடியம் தியோகிளைகோலேட் கூடுதலாக ஃபின்-II ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தில் அறிமுகப்படுத்தப்படுகிறது, இது ஆக்ஸிஜன் செறிவைக் குறைக்கிறது. லிப்பிட் பெராக்சைட்டின் நச்சுப் பொருட்களிலிருந்து மைக்கோபாக்டீரியாவின் நொதி அமைப்புகளைப் பாதுகாக்க, ஆக்ஸிஜனேற்ற α-டோகோபெரோல் அசிடேட் ஃபின்-II ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தில் 0.001 μg/ml செறிவில் அறிமுகப்படுத்தப்படுகிறது. கண்டறியும் பொருள் நிலையான முறையைப் பயன்படுத்தி விதைக்கப்படுகிறது.
ரஷ்யாவில் உள்ள காசநோய் எதிர்ப்பு ஆய்வகங்களில், அடர்த்தியான ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தின் பிற மாற்றங்களும் பயன்படுத்தப்படுகின்றன: ஜிஜி மோர்டோவ்ஸ்கியால் முன்மொழியப்பட்ட ஊட்டச்சத்து ஊடகம் "நோவயா", விஏ அனிகின் உருவாக்கிய ஊட்டச்சத்து ஊடகம் ஏ-6 மற்றும் ஏ-9 போன்றவை.
கீமோதெரபியின் போது, நுண்ணுயிர் செல்லின் பல்வேறு வளர்சிதை மாற்ற அமைப்புகளுக்கு சேதம் ஏற்படுவதால், மைக்கோபாக்டீரியல் மக்கள்தொகையின் ஒரு பகுதி வழக்கமான ஊட்டச்சத்து ஊடகங்களில் சாதாரணமாக வளரும் திறனை இழக்கிறது மற்றும் சவ்வூடுபரவல் சமநிலையான (அரை திரவ அல்லது திரவ) ஊட்டச்சத்து ஊடகம் தேவைப்படுகிறது.
நோயறிதல் பொருள் கலாச்சாரத்தின் முடிவுகளின் மதிப்பீடு மற்றும் பதிவு
சில வகையான மைக்கோபாக்டீரியாக்கள் மெதுவாக வளரும், 90 வது நாளில் கூட வளர்ச்சி தோன்றக்கூடும். இத்தகைய பயிர்களின் எண்ணிக்கை குறைவாக உள்ளது, ஆனால் இது விதைகளை 2.5-3 மாதங்களுக்கு ஒரு தெர்மோஸ்டாட்டில் வைத்திருக்க வேண்டிய கட்டாயத்தில் உள்ளது.
மைக்கோபாக்டீரியம் டியூபர்குளோசிஸின் வீரியம் மிக்க கலாச்சாரங்கள் பொதுவாக திடமான முட்டை ஊடகங்களில் வெவ்வேறு அளவு மற்றும் தோற்றத்தின் R-வடிவ காலனிகளாக வளரும். காலனிகள் வறண்டு, சுருக்கமாக, தந்த நிறத்தில், மற்றும் சற்று நிறமியுடன் இருக்கும். மற்ற ஊடகங்களில், மைக்கோபாக்டீரியம் டியூபர்குளோசிஸ் காலனிகள் அதிக ஈரப்பதமாக இருக்கலாம். கீமோதெரபிக்குப் பிறகு அல்லது சிகிச்சையின் போது, ஈரமான வளர்ச்சியுடன் கூடிய மென்மையான காலனிகள் (S-வடிவங்கள்) தனிமைப்படுத்தப்படலாம்.
கலாச்சாரங்களை தனிமைப்படுத்தும்போது, காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவை காசநோய் அல்லாத மைக்கோபாக்டீரியா மற்றும் அமில-வேக சப்ரோபைட்டுகளிலிருந்து வேறுபடுத்துவதற்கு சிறப்பு ஆய்வுகளின் தொகுப்பு பயன்படுத்தப்படுகிறது.
Ziehl-Neelsen படி படிந்த வளர்ந்த காலனிகளில் இருந்து ஒரு ஸ்மியர் கட்டாய நுண்ணோக்கி பரிசோதனைக்குப் பிறகு ஒரு நேர்மறையான பதில் வழங்கப்படுகிறது. மைக்கோபாக்டீரியா வளர்ச்சியின் விஷயத்தில், பிரகாசமான சிவப்பு தண்டுகள் ஸ்மியர்களில் காணப்படுகின்றன, தனித்தனியாகவோ அல்லது குழுக்களாகவோ கிடக்கின்றன, அவை ஃபீல்ட் அல்லது ஜடை வடிவத்தில் கொத்தாக உருவாகின்றன. இளம் கலாச்சாரங்களில், குறிப்பாக நீண்ட காலமாக கீமோதெரபி மூலம் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட நோயாளிகளிடமிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்டவற்றில், மைக்கோபாக்டீரியாக்கள் உச்சரிக்கப்படும் பாலிமார்பிஸத்தால் வேறுபடுகின்றன, குறுகிய, கிட்டத்தட்ட கோகோயிட் அல்லது நீளமான மாறுபாடுகள் பூஞ்சை மைசீலியத்தை ஒத்திருக்கும் வரை, தடி வடிவ வடிவங்களுடன் இருக்கும் வரை.
மைக்கோபாக்டீரியல் வளர்ச்சியின் தீவிரம் பின்வரும் திட்டத்தின் படி நிர்ணயிக்கப்படுகிறது: (+) - ஒரு சோதனைக் குழாயில் 1-20 CFU (குறைந்த பாக்டீரியா வெளியேற்றம்); (++) - ஒரு சோதனைக் குழாயில் 20-100 CFU (மிதமான பாக்டீரியா வெளியேற்றம்); (+++) - >ஒரு சோதனைக் குழாயில் 100 CFU (ஏராளமான பாக்டீரியா வெளியேற்றம்). காசநோயைக் கண்டறியும் ஆய்வகத்தில், ஒரு குறிப்பிட்ட முறையால் மைக்கோபாக்டீரியா கண்டறியப்பட்டுள்ளதா என்பதைக் குறிக்கும் பதிலை வழங்குவது போதாது. மைக்கோபாக்டீரியல் மக்கள்தொகையின் அளவு மற்றும் தன்மை, அதன் கலவை மற்றும் பண்புகள் பற்றிய விரிவான யோசனையும் அவசியம். இந்த தரவுகள்தான் செயல்முறையின் நிலையை சரியாக விளக்கவும், தந்திரோபாயங்களைத் திட்டமிடவும், சிகிச்சையை உடனடியாக சரிசெய்யவும் அனுமதிக்கின்றன.
சமீபத்திய ஆண்டுகளில், மைக்கோபாக்டீரியாவின் வளர்ச்சியை துரிதப்படுத்த பல்வேறு வளர்ச்சி சேர்க்கைகள் மற்றும் சிறப்பு வாயு கலவையைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் அகார் அடிப்படையிலான ஊட்டச்சத்து ஊடகங்கள் முன்மொழியப்பட்டுள்ளன. இந்த ஊடகங்களில் மைக்கோபாக்டீரியாவின் வளர்ச்சியைப் பெற, சாகுபடியின் போது அதிகரித்த கார்பன் டை ஆக்சைடு (4-7%) உள்ளடக்கம் கொண்ட ஒரு வளிமண்டலம் உருவாக்கப்படுகிறது. இதற்காக, சிறப்பு CO2 இன்குபேட்டர்கள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன . இருப்பினும், தானியங்கி மைக்கோபாக்டீரியா சாகுபடி அமைப்புகள் மிகப்பெரிய வளர்ச்சியைப் பெற்றுள்ளன: MGIT-BACTEC-960 மற்றும் MB/Bact.
அத்தகைய அமைப்புகளில் ஒன்று MGIT (மைக்கோபாக்டீரியா வளர்ச்சியைக் குறிக்கும் குழாய்) அமைப்பு ஆகும், இது ஒரு உயர் தொழில்நுட்ப வளர்ச்சியாகும், இது காசநோயின் விரைவான பாக்டீரியாவியல் நோயறிதல் மற்றும் முதல்-வரிசை மருந்துகள் மற்றும் சில இரண்டாம்-வரிசை மருந்துகளுக்கு மைக்கோபாக்டீரியா உணர்திறனை தீர்மானிப்பதற்காக வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது. MGIT VASTEC-960 சாதனத்தின் ஒரு பகுதியாகப் பயன்படுத்த வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது. மாற்றியமைக்கப்பட்ட மிடில்புரூக்-7H9 ஊடகத்தை அடிப்படையாகக் கொண்ட திரவ ஊட்டச்சத்து ஊடகத்துடன் சிறப்பு சோதனைக் குழாய்களில் நுண்ணுயிரிகள் வளர்க்கப்படுகின்றன. மைக்கோபாக்டீரியாவின் வளர்ச்சியைத் தூண்டவும், வெளிநாட்டு மைக்ரோஃப்ளோராவின் வளர்ச்சியை அடக்கவும், MGIT வளர்ச்சி துணை மற்றும் PANTA பாக்டீரியா எதிர்ப்பு மருந்துகளின் கலவை பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
நுண்ணுயிரிகளின் வளர்ச்சி ஒளியியல் ரீதியாக பதிவு செய்யப்படுகிறது. இது மைக்கோபாக்டீரியாக்கள் அவற்றின் வளர்ச்சியின் போது ஆக்ஸிஜனை உட்கொள்ளும்போது ஏற்படும் ஃப்ளோரசன்ஸை அடிப்படையாகக் கொண்டது. ஆக்ஸிஜனைச் சார்ந்த ஃப்ளோரோக்ரோம் சாயம் ஒரு சிறப்பு சோதனைக் குழாயின் அடிப்பகுதியில் அடங்கியுள்ளது மற்றும் சிலிகான் அடுக்குடன் மூடப்பட்டிருக்கும். மைக்கோபாக்டீரியா இனப்பெருக்கம் சோதனைக் குழாயில் ஆக்ஸிஜனின் அளவு குறைவதற்கும் அதன் செறிவு குறைவதற்கும் வழிவகுக்கிறது, இது ஃப்ளோரசன்ஸை அதிகரிக்கிறது, இது சோதனைக் குழாய் புற ஊதா ஒளியால் கதிர்வீச்சு செய்யப்படும்போது தெரியும் மற்றும் VASTES-960 சாதனத்தில் கட்டமைக்கப்பட்ட ஃபோட்டோசென்சர்களால் தானாகவே பதிவு செய்யப்படுகிறது. ஒளிர்வு தீவிரம் வளர்ச்சி அலகுகளில் (GU) பதிவு செய்யப்படுகிறது. வளர்ச்சித் தரவு தானாகவே ஒரு கணினியில் உள்ளிடப்படுகிறது, அங்கு அவை சேமிக்கப்படும். வளர்ச்சி வளைவுகளின் கணினி பகுப்பாய்வு, காசநோய் இல்லாதவை உட்பட பல்வேறு மைக்கோபாக்டீரியா குளங்கள் இருப்பது பற்றிய தகவலை வழங்க முடியும், மேலும் மைக்கோபாக்டீரியாவின் வளர்ச்சி பண்புகளை மதிப்பிடவும் உதவுகிறது.
இத்தகைய அமைப்புகளை அறிமுகப்படுத்தியதன் விளைவாக, மைக்கோபாக்டீரியா வளர்ச்சி நேரம் கணிசமாகக் குறைக்கப்பட்டுள்ளது, VASTEC-960 இல் சராசரியாக 11 நாட்களும், MB/Bact இல் 19 நாட்களும், ஒரு நிலையான அடர்த்தியான ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தில் 33 நாட்களும் ஆகும். இந்த அமைப்புகளுக்கு அதிக தகுதி வாய்ந்த பணியாளர்கள் தேவை என்பதை கவனத்தில் கொள்ள வேண்டும். திரவ ஊடகங்களில் பொருட்களை விதைப்பதற்கு லோவன்ஸ்டீன்-ஜென்சன் ஊடகத்தில் விதைப்பு அவசியம் தேவைப்படுகிறது, இது காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியா மற்ற ஊடகங்களில் வளராத சந்தர்ப்பங்களில் காப்புப் பிரதியாக செயல்படுகிறது.
[ 38 ], [ 39 ], [ 40 ], [ 41 ], [ 42 ], [ 43 ]
மைக்கோபாக்டீரியாவின் மருந்து உணர்திறனை தீர்மானித்தல்
காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்துகளுக்கு மைக்கோபாக்டீரியாவின் ஸ்பெக்ட்ரம் மற்றும் உணர்திறன் அளவை தீர்மானிப்பது மிகவும் மருத்துவ முக்கியத்துவம் வாய்ந்தது, அதே போல் மருந்து-எதிர்ப்பு காசநோயின் பரவலின் தொற்றுநோயியல் மதிப்பீட்டிற்கும். கூடுதலாக, மருந்து எதிர்ப்பைக் கண்காணிப்பது, காசநோய் எதிர்ப்புத் திட்டத்தின் செயல்திறனை ஒட்டுமொத்தமாக மதிப்பிட அனுமதிக்கிறது, இது காசநோய் எதிர்ப்பு நடவடிக்கைகளின் அனைத்து கூறுகளின் செயல்பாட்டின் ஒருங்கிணைந்த குறிகாட்டியாகும்.
மருந்து உணர்திறன் சோதனையின் அதிர்வெண் மற்றும் நேரம்:
- சிகிச்சையைத் தொடங்குவதற்கு முன், சிகிச்சை உத்தி மற்றும் தந்திரோபாயங்களைத் தீர்மானிக்க ஒரு முறை:
- ஒரு நோயாளியிடமிருந்து பல்வேறு பொருட்களிலிருந்து (சளி, பிஏஎல், சிறுநீர், எக்ஸுடேட்டுகள், செரிப்ரோஸ்பைனல் திரவம் போன்றவை) கலாச்சாரங்களை தனிமைப்படுத்தும்போது, அனைத்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட விகாரங்களும் பரிசோதிக்கப்படுகின்றன:
- மருத்துவ மற்றும் கதிரியக்க இயக்கவியல் இல்லாத நிலையில் சிகிச்சையின் தீவிர கட்டத்தின் முடிவில்:
- பின்வரும் சந்தர்ப்பங்களில் சிகிச்சை முறையை மாற்ற வேண்டிய அவசியம் ஏற்பட்டால்:
- ஸ்பூட்டம் எதிர்மறை இல்லாமை;
- ஸ்பூட்டம் எதிர்மறைக்குப் பிறகு மறு வளர்ப்பு;
- ஆரம்பக் குறைப்புக்குப் பிறகு ஒரு ஸ்மியரில் AFB அளவு கூர்மையான அதிகரிப்பு. வெவ்வேறு மருந்து உணர்திறன் கொண்ட மைக்கோபாக்டீரியம் டியூபர்குலோசிஸின் விகாரங்கள் காசநோய் உள்ள நோயாளியிடமிருந்து பொருட்களிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்படுகின்றன என்பது அனைவரும் அறிந்ததே. காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்துகளுக்கு விகாரங்களின் உணர்திறன் மருந்துகளின் நிறமாலை, அளவு, அதிர்வெண் மற்றும் எதிர்ப்பு வளர்ச்சியின் வேகத்தில் வேறுபடலாம்.
மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் மருந்து எதிர்ப்பின் அளவு நிறுவப்பட்ட அளவுகோல்களின்படி தீர்மானிக்கப்படுகிறது, அவை எதிர்ப்பின் மருத்துவ முக்கியத்துவத்தை மையமாகக் கொண்டுள்ளன மற்றும் மருந்தின் காசநோய் எதிர்ப்பு செயல்பாடு, அதன் மருந்தியக்கவியல், காயத்தில் செறிவு, அதிகபட்ச சிகிச்சை அளவு போன்றவற்றைப் பொறுத்தது.
மைக்கோபாக்டீரியாவின் மருந்து உணர்திறனைத் தீர்மானிப்பது தற்போது நுண்ணுயிரியல் முறைகளைப் பயன்படுத்தி மேற்கொள்ளப்படுகிறது:
- முழுமையான செறிவுகள் (திட அல்லது திரவ ஊட்டச்சத்து ஊடகங்களில் நீர்த்த முறை),
- விகிதாச்சாரங்கள்,
- எதிர்ப்பு குணகம்.
பொதுவாக, மைக்கோபாக்டீரியா காசநோயின் காலனிகளின் பார்வைக்குக் காணப்படும் வளர்ச்சியின் வடிவத்தில் எதிர்ப்பு வெளிப்படுகிறது, இருப்பினும், மைக்கோபாக்டீரியல் செல் பிரிவின் ஆரம்ப கட்டங்களில் வண்ண எதிர்வினைகளின் வடிவத்தில் வளர்ச்சியைத் தூண்டும் முறைகள் உள்ளன. இந்த முறைகள் சோதனை நேரத்தை 3-4 முதல் 2 வாரங்களாகக் குறைக்கின்றன.
WHO கீமோதெரபி குழுவால் பரிந்துரைக்கப்பட்ட முழுமையான செறிவு முறை ரஷ்யாவில் ஒருங்கிணைந்த முறையாக பரவலாகிவிட்டது. ஒரு முறையியல் பார்வையில், இது மிகவும் எளிமையானது, ஆனால் ஆய்வக நடைமுறைகளின் உயர் தரப்படுத்தல் மற்றும் துல்லியம் தேவைப்படுகிறது. மருந்து உணர்திறன் சோதனையானது காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்துகளால் மாற்றியமைக்கப்பட்ட ஊட்டச்சத்து ஊடகம் கொண்ட சோதனைக் குழாய்களின் தொகுப்பைக் கொண்டுள்ளது. இந்த தொகுப்பில் பயன்படுத்தப்படும் ஒவ்வொரு மருந்துகளின் வெவ்வேறு செறிவுகளைக் கொண்ட 2-3 சோதனைக் குழாய்கள், மருந்து இல்லாத ஊடகத்துடன் ஒரு கட்டுப்பாட்டு சோதனைக் குழாய் மற்றும் காசநோய் அல்லாத மைக்கோபாக்டீரியாவின் வளர்ச்சியைக் கண்டறிய 1000 μg/ml சோடியம் சாலிசிலேட் அல்லது 500 μg/ml பாரானிட்ரோபென்சோயிக் அமிலம் கொண்ட ஒரு சோதனைக் குழாய் ஆகியவை உள்ளன.
தயாரிப்புகளுடன் கூடிய ஊடகத் தொகுப்பைத் தயாரிக்க, மாற்றியமைக்கப்பட்ட லோவன்ஸ்டீன்-ஜென்சன் ஊடகத்தைப் பயன்படுத்தவும் (ஸ்டார்ச் இல்லாமல்), இது ஃபிளாஸ்க்குகளில் ஊற்றப்படுகிறது. காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்தின் தொடர்புடைய நீர்த்தலின் ஒரு குறிப்பிட்ட அளவு ஒவ்வொரு ஃபிளாஸ்க்குகளிலும் சேர்க்கப்படுகிறது. ஃபிளாஸ்க்குகளின் உள்ளடக்கங்கள் நன்கு கலக்கப்பட்டு, சோதனைக் குழாய்களில் ஊற்றப்பட்டு, 85 ° C வெப்பநிலையில் 40 நிமிடங்கள் சாய்ந்த நிலையில் உறைய வைக்கப்படுகின்றன. தானியங்கி வெப்பநிலைக் கட்டுப்பாட்டுடன் கூடிய மின்சார உறைவிப்பான் ஒன்றில் ஊடகத்தை உறைய வைக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்துகளுடன் நடுத்தரம்.
முதல் வரிசையை 2-4 °C வெப்பநிலையில் குளிர்சாதன பெட்டியில் 1 மாதம் சேமிக்கலாம், இரண்டாவது வரிசை மருந்துகளுடன் - 2 வாரங்களுக்கு மேல் இல்லை. அறை வெப்பநிலையில் மருந்துகளுடன் கூடிய ஊடகங்களை சேமிப்பது ஏற்றுக்கொள்ள முடியாதது. காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்துகளின் தீர்வுகளைத் தயாரிக்கும்போது, அவற்றின் செயல்பாடு கணக்கில் எடுத்துக்கொள்ளப்படுகிறது, மருந்தின் குறிப்பிட்ட பகுதி அல்லாத பகுதியின் மூலக்கூறு எடை, தூய்மை போன்றவற்றுக்கான சரிசெய்தலுடன் செறிவைக் கணக்கிடுகிறது. மருந்து உணர்திறனைத் தீர்மானிக்க, வேதியியல் ரீதியாக தூய்மையான பொருட்கள் மட்டுமே பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
மைக்கோபாக்டீரியா மக்கள்தொகையின் குறிப்பிடத்தக்க பகுதியின் வளர்ச்சியை அடக்கும் காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்தின் செறிவை தீர்மானிப்பதே இந்த முறையின் கொள்கையாகும். சரியாகச் செய்யும்போது, இந்த முறை நல்ல நம்பகத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளது.
சோதனை செய்வதற்கு முன், மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் தனிமைப்படுத்தப்பட்ட கலாச்சாரத்தில் வெளிப்புற மைக்ரோஃப்ளோரா இல்லை என்பதை உறுதிப்படுத்துவது அவசியம். 1 மில்லி (ஆப்டிகல் டர்பிடிட்டி ஸ்டாண்டர்ட் 5 யூனிட்கள்) இல் 500 மில்லியன் நுண்ணுயிர் உடல்களைக் கொண்ட ஒரு ஒரே மாதிரியான இடைநீக்கம், 0.9% சோடியம் குளோரைடு கரைசலில் மைக்கோபாக்டீரியத்தின் கலாச்சாரத்திலிருந்து தயாரிக்கப்படுகிறது. இதன் விளைவாக வரும் இடைநீக்கம் 0.9% சோடியம் குளோரைடு கரைசலுடன் (1:10) நீர்த்தப்பட்டு, ஊட்டச்சத்து ஊடகத் தொகுப்பின் ஒவ்வொரு சோதனைக் குழாயிலும் 0.2 மில்லி இடைநீக்கம் சேர்க்கப்படுகிறது. தடுப்பூசி போடப்பட்ட சோதனைக் குழாய்கள் 37 °C வெப்பநிலையில் ஒரு தெர்மோஸ்டாட்டில் வைக்கப்பட்டு 2-3 நாட்களுக்கு கிடைமட்டமாக வைக்கப்படுகின்றன, இதனால் ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தின் சாய்ந்த மேற்பரப்பு மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் இடைநீக்கத்துடன் சீராக தடுப்பூசி போடப்படுகிறது. பின்னர் சோதனைக் குழாய்கள் செங்குத்து நிலைக்கு நகர்த்தப்பட்டு 3-4 வாரங்களுக்கு அடைகாக்கப்படுகின்றன. 3-4 வாரங்களுக்குப் பிறகு முடிவுகள் பதிவு செய்யப்படுகின்றன.
ஊட்டச்சத்து ஊடகங்களில் மருத்துவப் பொருட்களிலிருந்து நோய்க்கிருமியை தனிமைப்படுத்த எடுக்கும் நேரம் குறைந்தது 1-1.5 மாதங்கள் என்பதால், இந்த முறையைப் பயன்படுத்தி மருந்து உணர்திறனை தீர்மானிப்பதன் முடிவுகளை, பொருளை விதைத்த 2-2.5 மாதங்களுக்கு முன்பே பெற முடியாது. இது இந்த முறையின் முக்கிய குறைபாடுகளில் ஒன்றாகும்.
மைக்கோபாக்டீரியல் மருந்து உணர்திறன் சோதனையின் முடிவுகள் சில அளவுகோல்களின் அடிப்படையில் விளக்கப்படுகின்றன. திட ஊடகங்களில், மருந்துடன் கொடுக்கப்பட்ட சோதனைக் குழாயில் வளர்க்கப்படும் மைக்கோபாக்டீரியல் காலனிகளின் எண்ணிக்கை 20 ஐத் தாண்டவில்லை என்றால், மருந்துகள் இல்லாமல் கட்டுப்பாட்டு சோதனைக் குழாயில் ஏராளமான வளர்ச்சியுடன் இருந்தால், ஒரு கலாச்சாரம் ஊடகத்தில் உள்ள மருந்தின் செறிவுக்கு உணர்திறன் கொண்டதாகக் கருதப்படுகிறது. 20 க்கும் மேற்பட்ட காலனிகள் இருந்தால் மட்டுமே, கொடுக்கப்பட்ட செறிவுக்கு கலாச்சாரம் எதிர்ப்புத் திறன் கொண்டதாகக் கருதப்படுகிறது. நடைமுறையில், 20 CFU க்கு அருகில் உள்ள சோதனைக் குழாய்களில் வளர்ச்சி முடிவுகள் பெறப்படும்போது, இந்த விஷயத்தில் உணர்திறன் அல்லது எதிர்ப்பு எல்லைக்கோடு என்பதை மருத்துவ அலகுக்குத் தெரிவிக்க வேண்டியது அவசியம், ஏனெனில் இது சில நேரங்களில் மருத்துவ குறிகாட்டிகளின் தெளிவற்ற இயக்கவியலை விளக்கக்கூடும்.
பல்வேறு தயாரிப்புகளுக்கு, ஒரு குறிப்பிட்ட செறிவு நிறுவப்பட்டுள்ளது, அதில் மைக்கோபாக்டீரியல் மக்கள்தொகையின் முக்கியமான விகிதத்தின் இனப்பெருக்கம் காணப்படுகிறது. இந்த செறிவுகள் "முக்கியமானவை" என்று அழைக்கப்படுகின்றன. ஒரு முக்கியமான செறிவில் உள்ள தயாரிப்பைக் கொண்ட ஒரு ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தில் மைக்கோபாக்டீரியல் மக்கள்தொகையின் வளர்ச்சியின் அளவு நிலைத்தன்மைக்கான அளவுகோலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.
உள்நாட்டு ஃபைப்டியாலஜி நடைமுறையில், மருந்து எதிர்ப்பை நிர்ணயிக்கும் போது, அவை முக்கியமான செறிவுகளை மட்டும் தீர்மானிப்பதில் மட்டும் மட்டுப்படுத்தப்படவில்லை. நோய்க்கிருமியின் மருந்து எதிர்ப்பின் அளவை விரிவுபடுத்திய வரையறை, மருந்து சேர்க்கைகளின் ஆற்றல்மிக்க விளைவைப் பற்றிய அறிவைப் பயன்படுத்தி, குறுக்கு-எதிர்ப்பை எதிர்பார்க்க அல்லது பயன்படுத்தப்பட்ட காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்துகளின் குழுவின் மிகவும் பயனுள்ள மருந்துகளைப் பயன்படுத்த, கீமோதெரபி தந்திரோபாயங்களை மிகவும் சரியாக உருவாக்க மருத்துவரை அனுமதிக்கிறது என்பதே இதற்குக் காரணம்.
முழுமையான செறிவு முறை மிகவும் எளிமையானது, ஆனால் அதன் செயல்படுத்தலில் ஏற்படும் பிழைகளுக்கு மிகவும் உணர்திறன் கொண்டது. குறிப்பாக இரண்டாம் வரிசை மருந்துகளுக்கு உணர்திறனை தீர்மானிக்கும்போது மிகவும் நம்பகமானது, மேலும் ரஷ்யாவிற்கு வெளியே பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் விகிதாசார முறை. இது முழுமையான செறிவு முறையின் குறைபாடுகளை கணக்கில் எடுத்துக்கொள்கிறது, ஆனால் அதை செயல்படுத்துவது மிகவும் உழைப்பு மிகுந்ததாகும்.
இந்த முறை முழுமையான செறிவு முறையைப் போன்றது. மருந்துகளுடன் சோதனைக் குழாய்களைத் தயாரிப்பது முழுமையான செறிவு முறையைப் போலவே உள்ளது. இருப்பினும், காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியம் சஸ்பென்ஷனின் விதை அளவு 10 மடங்கு குறைக்கப்படுகிறது, இது எத்தாம்புடோல், புரோதியோனமைடு, கேப்ரியோமைசின் போன்ற மருந்துகளுக்கு சில காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியம் விகாரங்களின் தன்னிச்சையான எதிர்ப்பின் அதிர்வெண்ணை நீக்குகிறது. கட்டுப்பாடுகளாக, சோதனைக் குழாய்களில் உள்ளதற்கு சமமான விதை அளவைக் கொண்ட 2 அல்லது 3 குழாய்கள், தொடர்ச்சியாக 10 மற்றும் 100 முறை நீர்த்தப்படுகின்றன. எதிர்ப்பிற்கான அளவுகோல் என்பது காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியத்தின் பார்வைக்குக் காணப்படும் வளர்ச்சியின் விகிதமாகும். 1வது-வரிசை மருந்துகளுக்கு, எதிர்ப்பிற்கான அளவுகோல் ஆரம்ப மக்கள்தொகையில் 1% அதிகப்படியான வளர்ச்சியாகும், 2வது-வரிசை மருந்துகளுக்கு - தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட முக்கியமான செறிவைப் பொறுத்து, ஆரம்பத்தின் 1 அல்லது 10% க்கும் அதிகமான வளர்ச்சி.
1997 ஆம் ஆண்டில், காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்து எதிர்ப்பைக் கண்டறிவதற்கான WHO மற்றும் சர்வதேச காசநோய் எதிர்ப்பு ஒன்றியப் பணிக்குழு இந்த அளவுகோல்களில் மாற்றங்களைச் செய்து, பின்வரும் செறிவுகளில் அடர்த்தியான லோவன்ஸ்டீன்-ஜென்சன் முட்டை ஊடகத்தில் வளரும் மைக்கோபாக்டீரியாவை எதிர்ப்புத் திறன் கொண்டதாகக் கருத முன்மொழிந்தது:
- டைஹைட்ரோஸ்ட்ரெப்டோமைசின் - 4 μg/மிலி;
- ஐசோனியாசிட் - 0.2 µg/மிலி:
- ரிஃபாம்பிசின் - 40 எம்.சி.ஜி/மி.லி:
- எதாம்புடால் - 2 எம்.சி.ஜி/மி.லி.
2001 ஆம் ஆண்டில், பின்வரும் இரண்டாம் வரிசை மருந்துகளுக்கு (1% முக்கியமான விகிதத்திற்கு) முக்கியமான செறிவுகள் முன்மொழியப்பட்டன:
- கேப்ரியோமைசின் - 40 எம்.சி.ஜி/மிலி;
- புரோட்டியோனமைடு - 40 எம்.சி.ஜி/மிலி;
- கனமைசின் - 30 μg/மிலி;
- வயோமைசின் - 30 μg/மிலி;
- சைக்ளோசரின் - 40 எம்.சி.ஜி/மி.லி;
- அமினோசாலிசிலிக் அமிலம் - 0.5 mcg/ml;
- ஆஃப்லோக்சசின் - 2 எம்.சி.ஜி/மி.லி.
வளர்ச்சி முடிவுகள் 4 வாரங்களுக்குப் பிறகு முதற்கட்டமாகவும், 6 வார சாகுபடிக்குப் பிறகு இறுதி முறையாகவும் மதிப்பிடப்படுகின்றன.
நவீன காசநோய் கீமோதெரபியில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் பைராசினமைடுக்கு மருந்தின் உணர்திறனைத் தீர்மானிக்க, பரிந்துரைக்கப்பட்ட முக்கிய செறிவு 200 μg/ml ஆகும். இருப்பினும், திட ஊட்டச்சத்து ஊடகங்களில் இந்த மருந்துக்கான மருந்து எதிர்ப்பைத் தீர்மானிக்க பொதுவாக ஏற்றுக்கொள்ளப்பட்ட முறை இன்னும் இல்லை, ஏனெனில் அதன் பாக்டீரியா எதிர்ப்பு செயல்பாடு அமில சூழலில் மட்டுமே வெளிப்படுகிறது (pH <6), இது தொழில்நுட்ப ரீதியாக பராமரிக்க கடினமாக உள்ளது. கூடுதலாக, மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் பல மருத்துவ கலாச்சாரங்கள் அமில சூழலுடன் கூடிய முட்டை ஊடகத்தில் வளர தயங்குகின்றன.
மைக்கோபாக்டீரியாவின் மருந்து உணர்திறனை நிர்ணயிப்பதற்கான முடிவுகளின் தரத்தை மதிப்பிடுவதற்கு, நிலையான அருங்காட்சியக திரிபு H37Rv இன் உணர்திறனை இணையாக தீர்மானிப்பதன் மூலம் லோவன்ஸ்டீன்-ஜென்சன் ஊடகத்தின் ஒவ்வொரு புதிய தொகுதியையும் கட்டுப்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. கூடுதலாக, முறைகள் நன்கு இனப்பெருக்கம் செய்யக்கூடிய மற்றும் சரியாக விளக்கப்பட்ட முடிவைக் கொடுக்கும் வகையில் பூர்த்தி செய்யப்பட வேண்டிய சில நுண்ணுயிரியல் அளவுகோல்கள் உள்ளன. காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியா கலாச்சாரத்தின் நம்பகத்தன்மை, ஒரே மாதிரியான இடைநீக்கம் மற்றும் இடைநீக்கத்தைப் பெறுவதற்கான விதிகள், காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியா கலாச்சாரங்களைத் தேர்ந்தெடுப்பதற்கான விதிகள் மற்றும் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட பாக்டீரியா வெகுஜனத்தின் பிரதிநிதித்துவம் ஆகியவை இதில் அடங்கும். மிகவும் மோசமான பாக்டீரியா வெளியேற்றத்துடன் மருந்து எதிர்ப்பை தீர்மானிப்பதன் நம்பகத்தன்மை குறைகிறது.
சமீபத்தில், தானியங்கி அமைப்புகளைப் பயன்படுத்தி மருந்து உணர்திறனைத் தீர்மானிக்கும் முறை நம்பிக்கைக்குரியதாக அங்கீகரிக்கப்பட்டுள்ளது. இந்த பகுதியில் மிகவும் மேம்பட்டது VASTEC MGIT-960 அடிப்படையிலான முன்னேற்றங்கள். இந்த வழக்கில், காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவின் மருந்து உணர்திறனை மாற்றியமைக்கப்பட்ட விகிதாச்சார முறையின் அடிப்படையில் தீர்மானிக்கப்படுகிறது. தீர்மானத்தின் போது, கட்டுப்பாட்டுக் குழாயிலும் மருந்துகளுடன் கூடிய குழாய்களிலும் காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவின் வளர்ச்சி விகிதம் ஒப்பிடப்படுகிறது. ஸ்ட்ரெப்டோமைசினுக்கு உணர்திறனைத் தீர்மானிக்க, ஐசோனியாசிட், ரிஃபாம்பிசின் மற்றும் எதாம்புடோல், SIRE கிட்டில் சேர்க்கப்பட்டுள்ள செறிவூட்டும் சேர்க்கைகள் மற்றும் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. பைராசினமைட்டுக்கு உணர்திறனைத் தீர்மானிக்க, PZA கிட் பயன்படுத்தப்படுகிறது. சோதனையின் போது, மருந்துகளுடன் கூடிய சோதனைக் குழாய்கள் காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவின் இடைநீக்கத்துடன் தடுப்பூசி போடப்படுகின்றன, அதே போல் அனைத்து மருந்துகளுக்கும் இடைநீக்கத்தின் 100 மடங்கு நீர்த்தலுடன் கட்டுப்பாட்டுக் குழாய்கள், பைராசினமைடைத் தவிர, இடைநீக்கம் நீர்த்தல் 10 மடங்கு ஆகும். கட்டுப்பாட்டுக் குழாயில் வளர்ச்சி 400 GU ஐ அடையும் போது 100 GU என்ற மைக்கோபாக்டீரியா வளர்ச்சி குறிகாட்டியே நிலைத்தன்மைக்கான அளவுகோலாகும் ("மைக்கோபாக்டீரியாவை தனிமைப்படுத்துவதற்கான கலாச்சார முறைகள்" ஐப் பார்க்கவும்). முடிவுகள் தானாகவே பதிவு செய்யப்பட்டு விளக்கப்பட்டு உள்ளிடப்பட்ட அல்லது தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட நிரலால் அமைக்கப்படுகின்றன.
திரவ ஊட்டச்சத்து ஊடகத்துடன் கூடிய சோதனைக் குழாயில் உள்ள இறுதி செறிவுகள் முக்கியமான செறிவுகளாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. தற்போது, முதல்-வரிசை மருந்துகள் மற்றும் சில இரண்டாம்-வரிசை மருந்துகளுக்கு முக்கியமான செறிவுகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன. காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவின் சைக்ளோசரின் மற்றும் அமினோசாலிசிலிக் அமிலத்திற்கு உணர்திறனை தீர்மானிப்பது முட்டை ஊட்டச்சத்து ஊடகத்தில் மட்டுமே செய்யப்படுகிறது என்பதை கவனத்தில் கொள்ள வேண்டும்.
விவரிக்கப்பட்ட அமைப்புடன் பணிபுரிவதற்கான ஒரு விரிவான நெறிமுறை, தனிமைப்படுத்தப்பட்ட கலாச்சாரத்தில் (அடர்த்தியான ஊட்டச்சத்து ஊடகத்துடன்) மருந்து உணர்திறன் சோதனை மற்றும் MGIT சோதனைக் குழாயில் மைக்கோபாக்டீரியாவின் முதன்மை வளர்ச்சியைப் பயன்படுத்துதல் ஆகிய இரண்டையும் அனுமதிக்கிறது. பிந்தைய விருப்பம் கலாச்சார ஆய்வுகளை நடத்துவதற்குத் தேவையான நேரத்தைக் கணிசமாகக் குறைக்கிறது, இது காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவின் கலாச்சாரம் குறித்த முழு முடிவுகளைப் பொருளைச் சேகரித்த 3 வாரங்களுக்குள் (மருந்து உணர்திறன் பற்றிய தகவல் உட்பட) பெற அனுமதிக்கிறது, அதே நேரத்தில் பாரம்பரிய முறை 3 வது மாதத்திற்குள் மட்டுமே இதை வழங்க முடியும். நோயாளி தீவிர சிகிச்சை கட்டத்தில் இருக்கும்போது சரியான நேரத்தில் முடிவுகள், ஆய்வுகளின் ஒப்பீட்டளவில் அதிக செலவை ஈடுசெய்யும்.
[ 44 ], [ 45 ], [ 46 ], [ 47 ], [ 48 ], [ 49 ], [ 50 ]
மைக்கோபாக்டீரியாவின் வேறுபாடு
பயன்படுத்தப்படும் ஊட்டச்சத்து ஊடகங்கள் கண்டிப்பாக தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டவை அல்ல என்பதைக் கருத்தில் கொண்டு, தனிமைப்படுத்தப்பட்ட மைக்கோபாக்டீரியாவின் அடுத்தடுத்த வேறுபாடு கட்டாயமாகக் கருதப்படுகிறது. மைக்கோபாக்டீரியாவை வேறுபடுத்துவதற்கான தேவை, இனத்தின் பிரதிநிதிகளால் ஏற்படும் நோயியல் செயல்முறைகளின் பல அம்சங்களால் ஏற்படுகிறது: காசநோய் மற்றும் மைக்கோபாக்டீரியோசிஸின் வெவ்வேறு போக்கு மற்றும் விளைவு, சில காசநோய் எதிர்ப்பு மருந்துகளுக்கு இயற்கை மருந்து எதிர்ப்பின் இருப்பு.
காசநோய் அல்லாத மைக்கோபாக்டீரியாவிலிருந்து எம். காசநோய் வளாகத்தின் மைக்கோபாக்டீரியாவின் முதன்மை அடையாளம் பின்வரும் பண்புகளின்படி மேற்கொள்ளப்படுகிறது என்பது அங்கீகரிக்கப்பட்டுள்ளது: அடர்த்தியான ஊட்டச்சத்து ஊடகங்களில் வளர்ச்சி விகிதம், நிறமி உருவாக்கம், காலனி உருவவியல், அமில எதிர்ப்பின் இருப்பு மற்றும் வளர்ச்சிக்கு உகந்த வெப்பநிலை.
துரதிர்ஷ்டவசமாக, எம். காசநோய் வளாகத்தின் மைக்கோபாக்டீரியாவை மற்ற அமில-வேக மைக்கோபாக்டீரியாவிலிருந்து நம்பத்தகுந்த முறையில் வேறுபடுத்தக்கூடிய ஒற்றை ஆய்வக முறை எதுவும் இல்லை; இருப்பினும், மேலே விவரிக்கப்பட்ட அறிகுறிகளின் கலவையும் கீழே கொடுக்கப்பட்டுள்ள பல உயிர்வேதியியல் சோதனைகளின் முடிவுகளும் 95% வரை நிகழ்தகவுடன் எம். காசநோய் வளாகத்தின் மைக்கோபாக்டீரியாவை அடையாளம் காண அனுமதிக்கிறது.
மெதுவாக வளரும் காசநோய் அல்லாத மைக்கோபாக்டீரியாவிலிருந்து M. காசநோய் வளாகத்தின் (M. காசநோய், M. போவிஸ், M. போவிஸ்BCG, M. africanum, M. microti, M. canettii மற்றும் பிற) மைக்கோபாக்டீரியாவை வேறுபடுத்த, பின்வரும் அறிகுறிகளின் இருப்பைக் கண்டறிய அடிப்படை உயிர்வேதியியல் சோதனைகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன:
- நிகோடினிக் அமிலத்தை உற்பத்தி செய்யும் திறன் (நியாசின் சோதனை):
- நைட்ரேட் ரிடக்டேஸ் செயல்பாடு;
- தெர்மோஸ்டபிள் கேட்டலேஸ்;
- சோடியம் சாலிசிலேட் (1 மி.கி/மி.லி) கொண்ட ஒரு ஊடகத்தில் வளர்ச்சி.
கூடுதல் சோதனையாக, 500 μg/ml பாரா-நைட்ரோபென்சோயிக் அமிலம் அல்லது 5% சோடியம் குளோரைடு கொண்ட ஊடகத்தில் வளர்ச்சி சோதனைகளையும் பயன்படுத்தலாம்.
பல பாக்டீரியாவியல் ஆய்வகங்கள் இந்த நுண்ணுயிரிகளை சிக்கலான மட்டத்தில் மட்டுமே அடையாளம் காண்கின்றன, இது ஆய்வகங்களின் வரையறுக்கப்பட்ட திறன்கள் மற்றும் நிபுணர்களின் வழிமுறை திறன்கள் காரணமாகும்.
நடைமுறையில் பெரும்பாலான சந்தர்ப்பங்களில், பின்வரும் சோதனைகள் M. காசநோய் மற்றும் M. போவிஸை வேறுபடுத்துவதற்கு போதுமானவை: நியாசின், நைட்ரேட் ரிடக்டேஸ், பைராசினமிடேஸ் மற்றும் 2 μg/ml தியோபீன்-2-கார்பாக்சிலிக் அமில ஹைட்ராசைடு கொண்ட ஊடகத்தில் வளர்ச்சி பதிவு. M. காசநோய் வளாகத்தின் மைக்கோபாக்டீரியா பின்வரும் அம்சங்களால் வகைப்படுத்தப்படுகிறது என்பது கணக்கில் எடுத்துக்கொள்ளப்படுகிறது:
- மெதுவான வளர்ச்சி (3 வாரங்களுக்கு மேல்);
- வளர்ச்சி வெப்பநிலை 35-37 o C க்குள்;
- நிறமி இல்லாமை (தந்த நிறம்);
- உச்சரிக்கப்படும் அமில-வேக நிறம்;
- நேர்மறை நியாசின் சோதனை;
- நேர்மறை நைட்ரேட் ரிடக்டேஸ் சோதனை;
- தெர்மோஸ்டபிள் கேட்டலேஸ் (68 o C) இல்லாதது.
- லோவன்ஸ்டீன்-ஜென்சன் ஊடகத்தில் வளர்ச்சி இல்லாமை:
- 1000 µg/மிலி சோடியம் சாலிசிலிக் அமிலம்,
- 500 mcg/ml பாரா-நைட்ரோபென்சோயிக் அமிலம்,
- 5% சோடியம் குளோரைடு:
- 1-5 μg/ml தியோபீன்-2-கார்பாக்சிலிக் அமிலத்தின் முன்னிலையில் வளர்ச்சி.
காசநோய் அல்லது மைக்கோபாக்டீரியோசிஸுடன் தொடர்புடைய எச்.ஐ.வி/எய்ட்ஸ் வழக்குகளின் பதிவு அதிர்வெண் அதிகரிப்புடன் தனிமைப்படுத்தப்பட்ட மைக்கோபாக்டீரியாவை வேறுபடுத்துவதன் பொருத்தம் கணிசமாக அதிகரிக்கும். தற்போது, இந்த அளவிலான வேலையைச் சரியாகச் செய்ய நடைமுறை பிராந்திய ஆய்வகங்கள் தயாராக உள்ளனவா என்பது குறித்து முழுமையான உறுதிப்பாடு இல்லை.
[ 51 ], [ 52 ], [ 53 ], [ 54 ], [ 55 ], [ 56 ], [ 57 ], [ 58 ]
காசநோயின் நோயெதிர்ப்பு நோயறிதல்
காசநோய் அல்லது மைக்கோபாக்டீரியாவுக்கு நோயெதிர்ப்பு மறுமொழி மாதிரியில் ஆரம்பத்தில் கண்டுபிடிக்கப்பட்ட பல உலகளாவிய நிகழ்வுகள், தயாரிப்புகள் மற்றும் நோயெதிர்ப்பு சோதனைகள் உள்ளன. இவற்றில் BCG மற்றும் டியூபர்குலின் ஆகியவை அடங்கும், தோல் DST (டியூபர்குலின் சோதனைகள் - பிர்கெட் மற்றும் மாண்டூக்ஸ் எதிர்வினைகள்), உணர்திறன் கொண்ட விலங்குகளுக்கு டியூபர்குலினை தோலடி முறையில் செலுத்துவதற்கான எதிர்வினை (கோச் நிகழ்வு). தொற்று நோய்களில் முதல் ஆன்டிபாடிகளில் சில காசநோயிலும் கண்டுபிடிக்கப்பட்டன. நிச்சயமாக, காசநோய் எதிர்ப்பு சக்தி மற்றும் அவற்றின் மரபணு கட்டுப்பாட்டின் வழிமுறைகள் பற்றிய ஆழமான புரிதல், நோயெதிர்ப்பு முறைகள் மற்றும் நோய் எதிர்ப்பு சக்தியை பாதிக்கும் தயாரிப்புகளின் பயன்பாடு phthisiology இன் நடைமுறை சிக்கல்களைத் தீர்க்க பரந்ததாக இருக்கும்.
தற்போதுள்ள மிக முக்கியமான மற்றும் சிக்கலான நடைமுறைச் சிக்கல், மக்கள்தொகையை பெருமளவில் பரிசோதிக்கும் செயல்பாட்டில் காசநோயைக் கண்டறிவதாகக் கருதப்படுகிறது. இருப்பினும், "வெற்றிகள்" (வரையறுக்கப்பட்ட பொருட்களில்) பற்றிய ஏராளமான அறிக்கைகள் இருந்தபோதிலும், இந்த நோக்கங்களுக்காக பொருத்தமான நோயெதிர்ப்பு முறை ("எந்தவொரு கைகளிலும்" மீண்டும் உருவாக்கக்கூடியது) அல்லது மருந்து எதுவும் இல்லை.
நோயெதிர்ப்பு முறைகள், குறிப்பாக செரோலாஜிக்கல் ஆய்வுகள் (ஆன்டிஜென்கள், ஆன்டிபாடிகள் தீர்மானித்தல்) மற்றும் காசநோய் தூண்டுதல் சோதனைகள் ஆகியவை மருத்துவ நடைமுறையில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
உடலின் வெவ்வேறு சூழல்களில் ஆன்டிஜென்கள் மற்றும் ஆன்டிபாடிகளை தீர்மானிக்கும் செரோலாஜிக்கல் முறைகள், வேறுபட்ட நோயறிதலில் பயன்படுத்தப்படும் நோயெதிர்ப்பு ஆய்வுகளில் முதலிடத்தில் உள்ளன.
மைக்கோபாக்டீரியா காசநோய்க்கான ஆன்டிபாடிகளை தீர்மானிப்பதன் தனித்தன்மை நோயெதிர்ப்பு பகுப்பாய்வில் பயன்படுத்தப்படும் ஆன்டிஜென்களைப் பொறுத்தது. கணிசமான எண்ணிக்கையிலான ஆன்டிஜென்கள் முன்மொழியப்பட்டுள்ளன, அவற்றில் முதலாவது டியூபர்குலின் பிபிடி:
- PPD மற்றும் வளர்ப்பு திரவத்திலிருந்து பிற சிக்கலான தயாரிப்புகள்;
- மீயொலி சிதைவு;
- ட்ரைடன் சாறு மற்றும் பிற சிக்கலான செல் சுவர் தயாரிப்புகள்;
- 5-ஆன்டிஜென் (டேனியல்);
- 60-ஆன்டிஜென் (கோசிட்டோ);
- லிபோஅராபினோமன்னன்;
- தண்டு காரணி (ட்ரெஹலோஸ்-6,6-டை-மைக்கோலேட்);
- பினோலிக் மற்றும் பிற கிளைகோலிப்பிடுகள்;
- லிப்போபோலிசாக்கரைடுகள்;
- ஃபைப்ரோனெக்டின்-பிணைப்பு ஆன்டிஜென்;
- புரதங்கள் (பெரும்பாலும் மறுசீரமைப்பு); 81,65,38,34,30,19,18,16,15.12 KDA, முதலியன.
ரஷ்ய மற்றும் வெளிநாட்டு விஞ்ஞானிகளின் பல ஆண்டுகால ஆராய்ச்சியின் விளைவாக, ஆன்டிபாடி உருவாக்கத்தின் முக்கிய வடிவங்கள் மற்றும் காசநோயின் செரோலாஜிக்கல் நோயறிதலின் செயல்திறன் அடையாளம் காணப்பட்டன: ஆன்டிஜென் மிகவும் சிக்கலானது, அதிக உணர்திறன் மற்றும் சோதனைகளின் தனித்தன்மை குறைவாக உள்ளது. எம். காசநோய் மற்றும் காசநோய் அல்லாத மைக்கோபாக்டீரியா, பி.சி.ஜி தடுப்பூசி போன்றவற்றால் மக்கள்தொகையின் தொற்றுநோயைப் பொறுத்து குறிப்பிட்ட தன்மை வெவ்வேறு நாடுகளில் மாறுபடும். குழந்தைகளில், செரோடியாக்னோஸ்டிக்ஸின் தகவல் உள்ளடக்கம் பெரியவர்களை விட குறைவாக உள்ளது. முதன்மை காசநோயில் (பெரும்பாலும் குழந்தைகள்), IgM இன் நிர்ணயம் அதிக தகவல் தரும்; இரண்டாம் நிலை காசநோயில் - IgG. எச்.ஐ.வி-பாதிக்கப்பட்டவர்களில், ஆன்டிபாடிகளை தீர்மானிப்பதில் செரோடியாக்னோஸ்டிக்ஸின் தகவல் உள்ளடக்கம் குறைகிறது. ஆன்டிபாடி தீர்மானத்தின் செயல்திறன் பல "மருத்துவ தருணங்களை" சார்ந்துள்ளது: செயல்முறையின் செயல்பாடு (மைக்கோபாக்டீரியாவின் "தனிமைப்படுத்தல்" இருப்பது அல்லது இல்லாமை, சிதைவு குழிகளின் இருப்பு, ஊடுருவலின் அளவு), செயல்முறையின் பரவல், அதன் போக்கின் காலம்.
நொதி இம்யூனோஅஸ்ஸே (EIA) முறையின் உணர்திறன் சுமார் 70% ஆகும். ஆய்வின் போதுமான செயல்திறன் இல்லாதது அதன் குறைந்த குறிப்பிட்ட தன்மை காரணமாகும். முன்னதாக, அதிக ஆபத்துள்ள குழுக்களில், குறிப்பாக நுரையீரலில் காசநோய்க்குப் பிந்தைய மாற்றங்கள் உள்ளவர்களில், செரோலாஜிக்கல் ஸ்கிரீனிங்கைப் பயன்படுத்துவதற்கான சாத்தியக்கூறுகள் கருதப்பட்டன.
ELISA இன் தனித்தன்மையை அதிகரிக்க, மரபணு பொறியியலால் பெறப்பட்டவை உட்பட, மேலும் குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜென்கள் தேடப்படுகின்றன: ESAT-6, முதலியன (மேலே காண்க). கண்டிப்பாக குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜென்களின் (38 kDa, ESAT) பயன்பாடு தனித்தன்மையை அதிகரிக்கிறது, ஆனால் பகுப்பாய்வின் உணர்திறனை கணிசமாகக் குறைக்கிறது. ELISA (Pathozyme ELISA கிட் போன்ற சோதனை ஆய்வக சோதனை அமைப்புகள்) உடன், பக்கவாட்டு வடிகட்டுதல் (மைக்கோடாட்) கொண்ட இம்யூனோக்ரோமடோகிராஃபிக் கருவிகளும் வழங்கப்படுகின்றன, அதே போல் சோதனை முடிவின் காட்சி மதிப்பீட்டைக் கொண்ட பிற ஒத்த சோதனைகளும் (சவ்வு புள்ளி பகுப்பாய்வு) வழங்கப்படுகின்றன. இந்த சோதனைகளை மேற்கொள்ளும்போது, பகுப்பாய்வு 10-30 நிமிடங்கள் ஆகும்; அவற்றுக்கு சிறப்பு உபகரணங்கள் தேவையில்லை, அவற்றுக்கு முடிவுகளின் காட்சி மதிப்பீடு தேவைப்படுகிறது, இது ஒரு குறிப்பிட்ட அகநிலைத்தன்மையுடன் தொடர்புடையது. இந்த முறைகள் பாரம்பரிய ELISA ஐப் போலவே தோராயமாக அதே உணர்திறன் மற்றும் தனித்தன்மை பண்புகளைக் கொண்டுள்ளன (முறையே 70% மற்றும் 90-93%).
காசநோயின் வேறுபட்ட நோயறிதலில் பயன்படுத்தப்படும் முறைகளின் சிக்கலானது, குறிப்பாக அதன் எக்ஸ்ட்ராபுல்மோனரி வடிவங்களைக் கண்டறிவதில், நோயெதிர்ப்பு பகுப்பாய்வு முறைகளின் பயன்பாடு ஒரு குறிப்பிட்ட மதிப்பைக் கொண்டுள்ளது. செரிப்ரோஸ்பைனல் திரவத்தை ஆய்வு செய்யும் போது காசநோய் மூளைக்காய்ச்சலைக் கண்டறிவதில் ELISA முறை மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும். இந்த வழக்கில், பகுப்பாய்வின் உணர்திறன் 80-85%, மற்றும் தனித்தன்மை 97-98% ஆகும். காசநோய் யுவைடிஸ் நோயறிதலில் கண்ணீர் திரவத்தில் மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோய்க்கான ஆன்டிபாடிகளை தீர்மானிப்பதன் செயல்திறன் பற்றிய தகவல்கள் உள்ளன.
காமா இன்டர்ஃபெரான் தொகுப்பின் தூண்டல் இன் விட்ரோ
காமா இன்டர்ஃபெரான் (IFN-γ) என்பது குறிப்பிட்ட நோயெதிர்ப்பு பாதுகாப்பின் ஒரு காரணியாகும், இது மேக்ரோபேஜ்களின் நொதி அமைப்புகளை செயல்படுத்துவதன் மூலம் உணரப்படுகிறது. உணர்திறன் கொண்ட டி-லிம்போசைட்டுகளால் IFN-γ தொகுப்பின் தூண்டல் மைக்கோபாக்டீரியல் ஆன்டிஜென்களுடனான அவற்றின் தொடர்புகளால் ஏற்படுகிறது.
மரபணு பொறியியலால் பெறப்பட்ட டியூபர்குலின் PPD மற்றும் குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜென்கள் இரண்டும் ஆன்டிஜென்களாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, குறிப்பாக ESAT-6 ஆன்டிஜென் (6 kDa மூலக்கூறு எடையுடன் ஆரம்பகால சுரக்கும் ஆன்டிஜென்) மற்றும் CFP-10 (கல்ச்சர் ஃபில்ட்ரேட் புரதம், 10 kDa). மரபணு ரீதியாக வடிவமைக்கப்பட்ட அல்லது மறுசீரமைப்பு ஆன்டிஜென்கள் BCG தடுப்பூசி மற்றும் பிற மைக்கோபாக்டீரியாவின் செல்களில் இல்லை. டியூபர்குலினைப் பயன்படுத்தும் போது, IFN-γ தூண்டல் சோதனையின் முடிவுகள் டியூபர்குலின் தோல் சோதனையின் முடிவுகளுடன் ஒப்பிடத்தக்கவை (நேரடி தொடர்பு). மரபணு ரீதியாக வடிவமைக்கப்பட்ட ஆன்டிஜென்களைப் பயன்படுத்தும் போது, சோதனை முடிவுகள் மிகவும் குறிப்பிட்டவை மற்றும் முந்தைய BCG தடுப்பூசியைச் சார்ந்தது அல்ல. காசநோய் தொற்றுடன் தொடர்பு கொள்ளாத தடுப்பூசி போடப்பட்ட நபர்களை பரிசோதிக்கும் போது, சோதனையின் தனித்தன்மை 99% ஆகும். காசநோய் நோயாளிகளிடையே சோதனையின் உணர்திறன் 81 முதல் 89% வரை இருக்கும்.
காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியா ஆன்டிஜென்கள் உள்ள இரத்தத்திலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட முழு இரத்த அணுக்கள் அல்லது மோனோநியூக்ளியர் செல்களை இன் விட்ரோவில் பிரித்தெடுப்பதன் அடிப்படையில் சோதனைகள் மற்றும் நோயறிதல்கள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன, அதைத் தொடர்ந்து IFN-γ செறிவை தீர்மானித்தல் அல்லது IFN-γ ஐ ஒருங்கிணைக்கும் டி-லிம்போசைட்டுகளின் எண்ணிக்கையை எண்ணுதல் ஆகியவை மேற்கொள்ளப்படுகின்றன. ஒரு சோதனைக் குழாயில் தொகுக்கப்பட்ட இன்டர்ஃபெரானின் செறிவு IFN-γ ஐ பிணைக்கும் மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தி ELISA ஆல் தீர்மானிக்கப்படுகிறது. பின்னர், நிலையான IFN-γ இன் அளவுத்திருத்தத்தைப் பயன்படுத்தி, சோதனைக் குழாய் அல்லது தட்டு கிணறுகளில் அதன் செறிவு தீர்மானிக்கப்படுகிறது.
எலிஸ்பாட் சோதனையில், IFN-γ ஐ ஒருங்கிணைக்கும் T செல்களின் எண்ணிக்கை, IFN-γ க்கு ஆன்டிபாடிகள் பூசப்பட்ட ஒரு பாத்திரத்தின் மேற்பரப்பில் கணக்கிடப்படுகிறது.
அமெரிக்க உணவு மற்றும் மருந்து நிர்வாகத்தால் அங்கீகரிக்கப்பட்ட இன் விட்ரோ IFN-γ தூண்டல் நோயறிதலின் உருவாக்குநர்கள், இந்த சோதனை மறைந்திருக்கும் காசநோய் தொற்றையும் செயலில் உள்ள காசநோயையும் வேறுபடுத்திப் பார்க்க முடியாது என்று கூறுகின்றனர். எனவே, அதிக தொற்று விகிதம் உள்ள பகுதிகளில், சோதனைக்கு நேரடி நோயறிதல் மதிப்பு இல்லை. இருப்பினும், நம் நாட்டில், தடுப்பூசிக்குப் பிந்தைய ஒவ்வாமையிலிருந்து குழந்தைகளில் காசநோய் தொற்றை வேறுபடுத்துவதற்கும், சிகிச்சையின் போது குறிப்பிட்ட நோய் எதிர்ப்பு சக்தியின் அளவை மதிப்பிடுவதற்கும் இதைப் பயன்படுத்தலாம்.
தற்போது, குறிப்பிட்ட காசநோய் ஆன்டிஜென்களால் IFN-γ தொகுப்பின் தூண்டலை இன் விட்ரோவில் தீர்மானிப்பதற்கான ஒரு உள்நாட்டு சோதனை முறை ஆய்வுக்கு உட்பட்டுள்ளது.
நோயெதிர்ப்பு நிலை மற்றும் காசநோயின் போக்கு, நோயெதிர்ப்பு திருத்தம்
காசநோய் சிகிச்சையின் போது, மக்களில் ஆன்டிஜெனீமியா மற்றும் நோயெதிர்ப்பு மண்டலத்தின் நிலையில் மாற்றங்கள் ஏற்படுகின்றன.
எக்ஸுடேட்டுகள் மற்றும் திசுக்களில் ஏற்படும் மாற்றங்கள் குறித்த தரவு பெரும்பாலும் முரண்பாடாக உள்ளது. முழு நியாயப்படுத்தலுடன் கவனிக்கக்கூடிய ஒரே விஷயம் என்னவென்றால், காசநோய் கிரானுலோமாக்கள், ஒரு விதியாக, குறிப்பிடத்தக்க எண்ணிக்கையிலான செயல்படுத்தப்பட்ட டி-லிம்போசைட்டுகளைக் கொண்டுள்ளன.
மனிதர்களில் காசநோய் சிகிச்சையில் நோயெதிர்ப்பு வழிமுறைகளின் பங்கைப் புரிந்துகொள்வதற்குத் தேவையான இரண்டு புள்ளிகளைப் பற்றிப் பேசுவது அர்த்தமுள்ளதாக இருக்கிறது:
- எய்ட்ஸ் நோயாளிகளுக்கு பல மருந்து எதிர்ப்பு சக்தி உருவாகும் வாய்ப்பு அதிகம்;
- பல மருந்து எதிர்ப்பு (மற்றும் எச்.ஐ.வி தொற்று இல்லாத நிலையில்), நோயெதிர்ப்பு கோளாறுகள் (முக்கியமாக டி-செல் நோய் எதிர்ப்பு சக்தி) குறிப்பாக குறிப்பிடத்தக்கவை.
காசநோயில், நோயெதிர்ப்புத் திருத்தத்தின் பல்வேறு முறைகள் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன: முதலாவதாக, இவை முக்கியமாக டி-செல் நோய் எதிர்ப்பு சக்தி மற்றும் மோனோநியூக்ளியர் பாகோசைட் அமைப்பு (தைமஸ் ஹார்மோன்கள், ஐசோபோன், லைகோபிட், பாலிஆக்ஸிடோனியம், முதலியன), அத்துடன் முழு (அட்டன்யூட்டட்) மைக்கோபாக்டீரியா மற்றும் அவற்றின் கூறுகளில் செயல்படும் மருந்துகள்.
காசநோயின் மூலக்கூறு உயிரியல் நோயறிதல்
தொற்று நோய் கண்டறிதலில் மூலக்கூறு உயிரியல் முறைகள் முக்கியமாக குறிப்பிட்ட மரபணுப் பொருளை அடையாளம் காண பாக்டீரியா மற்றும் வைரஸ் நோய்க்கிருமிகளின் மரபணுப் பொருட்களை கையாளுவதை அடிப்படையாகக் கொண்ட முறைகளை உள்ளடக்கியது - கொடுக்கப்பட்ட இனம் அல்லது நோய்க்கிருமியின் திரிபுக்கு குறிப்பிட்ட நியூக்ளியோடைடு வரிசையுடன் கூடிய டிஎன்ஏ பிரிவுகள், சில மருந்துகளுக்கு நோய்க்கிருமியின் உணர்திறனை தீர்மானிக்கும் மரபணுக்களில் குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ வரிசைகளை பகுப்பாய்வு செய்வதற்கும், நோய்க்கிருமியின் சில மரபணுக்களின் செயல்பாட்டு செயல்பாட்டை பகுப்பாய்வு செய்வதற்கும். 1985 ஆம் ஆண்டில் கேரி முல்லிஸ் (நோபல் பரிசு பெற்றவர். 1989) பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை கண்டுபிடித்த பிறகு, பல்வேறு பாக்டீரியா மற்றும் வைரஸ் தொற்றுகளைக் கண்டறிதல் மற்றும் கண்காணிப்பதில் அறிவியல் ஆராய்ச்சி மற்றும் நடைமுறை பயன்பாட்டில் மூலக்கூறு உயிரியல் முறைகள் பரவலாகிவிட்டன.
பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை முறையின் கொள்கைகள் மற்றும் திறன்கள்
PCR ஒரு சோதனைக் குழாயில் உள்ள நியூக்ளியோடைடு வரிசையை (நோய்க்கிருமி டிஎன்ஏவின் ஒரு பகுதி) சில மணிநேரங்களில் மில்லியன் கணக்கான மடங்கு பெருக்க (பெருக்க) அனுமதிக்கிறது. ஒற்றை டிஎன்ஏ சங்கிலிகளின் முன்னிலையில் எதிர்வினை நடத்துவது பகுப்பாய்வின் விதிவிலக்காக அதிக உணர்திறனை தீர்மானிக்கிறது.
டிஎன்ஏ சங்கிலியின் சில பிரிவுகளின் நியூக்ளியோடைடு வரிசை, நுண்ணுயிரிகளின் மரபணு தனித்துவத்தை தீர்மானிக்கிறது, இது PCR இன் உயர் தனித்துவத்தை விளக்குகிறது.
மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் பண்புகளைக் கண்டறிந்து ஆய்வு செய்வதற்கான இந்த முறையின் முக்கியத்துவம், நுண்ணுயிரிகளின் உயிரியல் பண்புகள் காரணமாகும், இது மிகவும் மெதுவான வளர்ச்சியைக் கொண்டுள்ளது: அவற்றின் சாகுபடியின் போது மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் டிஎன்ஏ இரட்டிப்பாக்க நேரம் 12-24 மணிநேரம் ஆகும்.
PCR முறையின் கொள்கை பெருக்கம் ஆகும் - ஒரு சோதனைக் குழாய் நுண் தொகுதியில் ஒரு குறிப்பிட்ட DNA வரிசையின் பிரிவுகளின் பல, மில்லியன் மடங்கு பெருக்கல், பின்வரும் மூன்று எதிர்வினை நிலைகளின் சுழற்சி மீண்டும் மீண்டும், ஒவ்வொன்றும் வெவ்வேறு வெப்பநிலை ஆட்சியில் நடைபெறுகிறது:
- நிலை I - இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவை அதன் சங்கிலிகளின் வேறுபாட்டுடன் சூடாக்கும் போது அதன் இயற்கை நீக்கம்;
- நிலை II - பெருக்கத்திற்காக தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட கண்டிப்பாக குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ துண்டின் சங்கிலிகளின் இறுதிப் பிரிவுகளுடன் ப்ரைமர்களின் (ப்ரைமிங் ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள்) நிரப்பு பிணைப்பு (கலப்பினமாக்கல்);
- நிலை III - தெர்மோஸ்டபிள் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸைப் பயன்படுத்தி டிஎன்ஏ துண்டு சங்கிலியை நிறைவு செய்தல்.
பெருக்கத்திற்கு, சோதனைக் குழாயில் மேட்ரிக்ஸ் டி.என்.ஏ மூலக்கூறுகள் இருக்க வேண்டும். தொடர்புடைய நைட்ரஜன் தளங்களைக் கொண்ட நான்கு வகையான டியாக்ஸிநியூக்ளியோசைடு ட்ரைபாஸ்பேட்டுகள் (நியூக்ளியோடைடுகள்): அடினீன் (ஏ), தைமின் (டி), குவானைன் (ஜி), சைட்டோசின் (சி); 18-20 அடிப்படை ஜோடிகளைக் கொண்ட செயற்கையாக ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட ப்ரைமிங் ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள் (ப்ரைமர்கள்); 68-72 ° C வெப்பநிலை உகந்ததாகவும், மெக்னீசியம் அயனிகளைக் கொண்ட தெர்மோஸ்டபிள் என்சைம், டி.என்.ஏ பாலிமரேஸ்.
PCR இன் தனித்தன்மை DNA துண்டின் தேர்வைப் பொறுத்தது. அதற்கு இணங்க, பக்கவாட்டு ப்ரைமர் ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள் ஒருங்கிணைக்கப்படுகின்றன. கலப்பினமாக்கல் மற்றும் DNA சங்கிலியின் நிறைவு ஆகியவற்றின் தனித்தன்மை பின்வரும் ஜோடி நைட்ரஜன் தளங்களின் நிரப்புத்தன்மையின் கொள்கையால் தீர்மானிக்கப்படுகிறது: அடினீன்-தைமைன், குவானைன்-சைட்டோசின்.
காசநோய் சிக்கலான மைக்கோபாக்டீரியாவின் மரபணுவைத் தீர்மானிக்க, பெரும்பாலான சோதனை அமைப்புகளில் மிகவும் பயனுள்ள பெருக்க இலக்கு IS6110 DNA துண்டு ஆகும், இது பெரும்பாலான காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியா விகாரங்களில் மரபணுவில் குறிப்பிடத்தக்க எண்ணிக்கையிலான (10-20) மறுநிகழ்வுகளைக் கொண்டுள்ளது, இது குறிப்பிட்ட தன்மையுடன், பகுப்பாய்வின் அதிக உணர்திறனை உறுதி செய்கிறது. அதே நேரத்தில், குறைந்த எண்ணிக்கையிலான மறுநிகழ்வுகள் அல்லது IS6110 துண்டு இல்லாத காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியா விகாரங்கள் விவரிக்கப்பட்டுள்ளன.
உயிரியல் மாதிரியிலிருந்து டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளைப் பிரித்தெடுத்தல்
PCR ஐச் செய்ய, நோய்க்கிருமியின் DNA மூலக்கூறுகள் உயிரியல் பொருட்களிலிருந்து குறைந்தபட்ச அளவில் தனிமைப்படுத்தப்பட வேண்டும், குறைந்தபட்ச அளவு குறிப்பிட்ட அல்லாத DNA மற்றும் நொதியின் பல்வேறு தடுப்பான்கள் - DNA பாலிமரேஸ் ஆகியவற்றைக் கொண்டிருக்க வேண்டும்.
தனிமைப்படுத்தப்பட்ட டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளுடன் ஆய்வு செய்யப்படும் மாதிரிகளின் குறுக்கு-மாசுபாட்டைத் தடுக்கும் நிலைமைகளின் கீழ் மாதிரி தயாரிப்பு மேற்கொள்ளப்பட வேண்டும். இதற்கு அறையின் புற ஊதா ஒளி, தரைகள் மற்றும் மேசைகள் மற்றும் சாதனங்களின் வேலை மேற்பரப்புகள் - குளோரின் கொண்ட கரைசல்களுடன் - பூர்வாங்க சிகிச்சை தேவைப்படுகிறது. சுத்தமான கையுறைகள், ஒருமுறை தூக்கி எறியும் சோதனைக் குழாய்கள் மற்றும் தானியங்கி பைப்பெட்டுகளுக்கான குறிப்புகளைப் பயன்படுத்துவதும் அவசியம்.
அதிக எண்ணிக்கையிலான லுகோசைட்டுகள், செல்லுலார் குப்பைகள் அல்லது உப்புகள் இல்லாத மருத்துவ மாதிரிகளிலிருந்து (செரிப்ரோஸ்பைனல் திரவம், மூச்சுக்குழாய் அழற்சி) மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் டிஎன்ஏவை தனிமைப்படுத்த, நிமிடத்திற்கு 3-4 ஆயிரம் புரட்சிகளில் மாதிரியை மையவிலக்கு செய்து, ட்ரைட்டான் எக்ஸ்-100 இன் 2% கரைசலில் 20-30 µl ஐ வண்டலில் சேர்த்து 90 o C வெப்பநிலையில் 30 நிமிடங்கள் சூடாக்கவும்.
சளி மாதிரி தயாரிப்பிற்கு திறமையான திரவமாக்கல் தேவைப்படுகிறது, பொதுவாக மாதிரி பாகுத்தன்மையைப் பொறுத்து, ஒரு மாதிரிக்கு 50-80 மி.கி என்ற அளவில் 4% சோடியம் ஹைட்ராக்சைடு மற்றும் N-அசிடைல்-எல்-சிஸ்டைன் (NALC) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்துகிறது. NALC கரைசலை முன்கூட்டியே தயாரிக்க வேண்டும், அல்லது NALC பொடியை மாதிரியில் நேரடியாக உலர்வாக சேர்க்கலாம். திரவமாக்கலுக்குப் பிறகு, மாதிரிகளை 50 மில்லி திருகு-மூடி குழாய்களில் 3,500-4,000 rpm (3,000 கிராம்) இல் 15 நிமிடங்கள் மையவிலக்கு செய்ய வேண்டும், அதாவது முன்-வளர்ப்பு சளி தயாரிப்புக்கு பரிந்துரைக்கப்பட்ட அதே நிலைமைகளின் கீழ்.
வண்டலில் இருந்து டிஎன்ஏவைப் பிரித்தெடுக்க, குவானிடைன் ஐசோதியோசயனேட்டின் 5-6 மோலார் கரைசலை லைசிங் ரீஜென்டாகவும், டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளை உறிஞ்சும் மைக்ரோபோரஸ் சிலிக்கான் ஆக்சைடு துகள்கள் ("டையோடோமேசியஸ் எர்த்") பயன்படுத்துவதை அடிப்படையாகக் கொண்ட ஒரு முறை பெரும்பாலும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. சாத்தியமான தடுப்பான்கள் உட்பட குறிப்பிட்ட அல்லாத பொருட்கள் பின்னர் குவானிடைன் ஐசோதியோசயனேட்டின் 2.5 மோலார் கரைசலிலும் ஒரு எத்தனால் கரைசலிலும் கழுவப்படுகின்றன, அதன் பிறகு டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகள் தண்ணீரில் உறிஞ்சப்படுகின்றன, மேலும் இந்த மாதிரிகள் PCR செய்யப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கும் தொழில்நுட்பத்தை எளிமைப்படுத்த, "டையோடோமேசியஸ் எர்த்" பெரும்பாலும் சிலிக்கான் ஆக்சைடுடன் பூசப்பட்ட காந்த நுண் துகள்களால் மாற்றப்படுகிறது. இந்த வழக்கில், மையவிலக்குக்கு பதிலாக துகள்களை வீழ்படிவாக்க நுண்குழாய்களுக்கான சிறப்பு காந்த நிலைப்பாடு பயன்படுத்தப்படுகிறது.
ரஷ்யாவில், மைக்கோபாக்டீரியாவை நோயெதிர்ப்பு காந்தப் பிரிப்பதன் மூலம், நோய்க்கிருமி டி.என்.ஏவை பிரித்தெடுப்பதற்கான ஒரு அசல் முறை உருவாக்கப்பட்டுள்ளது. காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவின் நோயெதிர்ப்பு காந்தப் பிரிப்புக்கு, சிலிக்கான் ஆக்சைடுடன் பூசப்பட்ட 3-5 μm அளவுள்ள ஃபெரோ துகள்கள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, அவற்றுடன் காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவிற்கான பாலிக்ளோனல் (முயல்) ஆன்டிபாடிகள் ஒரு வேதியியல் பிணைப்பு மூலம் இணைக்கப்படுகின்றன. கார சிதைவுக்குப் பிறகு சளி மாதிரிகள் ஒரு அமில டிரிஸ்-எச்சிஎல் கரைசலுடன் நடுநிலையாக்கப்பட்டு, ஒரு நோயெதிர்ப்பு காந்த சோர்பென்ட் மூலம் அடைகாக்கப்படுகின்றன. பின்னர் இம்யூனோஃபெரோ துகள்கள் மாற்றக்கூடிய முனையுடன் கூடிய காந்தக் கம்பியைப் பயன்படுத்தி சேகரிக்கப்பட்டு, ஒரு நுண்குழாய்க்கு மாற்றப்பட்டு, வீழ்படிவாக்கப்படுகின்றன. 2% ட்ரைட்டான் எக்ஸ்-100 கரைசலில் 20-30 μl சேர்க்கப்பட்டு 90 o C இல் 30 நிமிடங்கள் சூடேற்றப்படுகிறது. சூப்பர்நேட்டண்ட் PCR பகுப்பாய்விற்கான DNA மேட்ரிக்ஸாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.
பயாப்ஸி மாதிரிகளிலிருந்து காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியம் டிஎன்ஏவை பிரித்தெடுப்பது ஒரு கடினமான பிரச்சனையாகும். பயாப்ஸி சிதைவுக்கு, புரோட்டினேஸ் கே என்ற நொதி 200-500 மி.கி/லி இறுதி செறிவில் 56 o C வெப்பநிலையில் இரவு முழுவதும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. பின்னர், அறியப்பட்ட முறைகளில் ஒன்றைப் பயன்படுத்தி இது பிரித்தெடுக்கப்படுகிறது. பயாப்ஸி மாதிரிகளின் PCR பகுப்பாய்வில் அதிகப்படியான குறிப்பிட்ட அல்லாத டிஎன்ஏ பெரும்பாலும் எதிர்வினையைத் தடுக்கிறது, இதற்கு மீண்டும் மீண்டும் டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் தேவைப்படுகிறது.
முடிவுகளைக் கண்டறியும் முறைகள்
எதிர்வினை முடிந்த பிறகு, பல்வேறு முறைகளைப் பயன்படுத்தி நோய்க்கிருமி டிஎன்ஏவின் பெருக்கப்பட்ட துண்டுகள் அடையாளம் காணப்படுகின்றன.
ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் முறை நன்கு அறியப்பட்டதாகும். இந்த வழக்கில், பெறப்பட்ட டி.என்.ஏ துண்டு, விரும்பிய குறிப்பிட்ட டி.என்.ஏ துண்டு கொண்ட நேர்மறை கட்டுப்பாட்டின் மூலம் அல்லது துண்டின் முன்னர் அறியப்பட்ட அளவு (நியூக்ளியோடைடு ஜோடிகளின் எண்ணிக்கை) மூலம் அடையாளம் காணப்படுகிறது, இது ஒரு நிலையான மூலக்கூறு மார்க்கரைப் பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்படுகிறது.
இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவில் சேர்க்கப்பட்டுள்ள எத்திடியம் புரோமைடு என்ற குறிப்பிட்ட சாயத்தின் முன்னிலையில், ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட டிஎன்ஏ துண்டு புற ஊதா ஒளியின் செல்வாக்கின் கீழ் ஒளிரும் ஒரு பட்டையாக வெளிப்படுகிறது.
தொடக்கத்திலிருந்து பயணித்த தூரத்தின் அடிப்படையில் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் தீர்மானிக்கப்படும் டிஎன்ஏ துண்டின் அளவு, அறியப்பட்ட மூலக்கூறு எடை குறிப்பான் அல்லது நேர்மறை கட்டுப்பாட்டுடன் ஒத்திருக்க வேண்டும்.
PCR முடிவுகளைத் தீர்மானிப்பதற்கான பிற முறைகள், ஒற்றை-தனிமைப்படுத்தப்பட்ட PCR தயாரிப்புகளை ஒரு நிரப்பு ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுடன் கலப்பினமாக்குவதை அடிப்படையாகக் கொண்டவை - பயோட்டினுடன் பெயரிடப்பட்ட ஒரு DNA ஆய்வு, அதைத் தொடர்ந்து ஒரு நொதி எதிர்வினையைப் பயன்படுத்தி கண்டறிதல், எடுத்துக்காட்டாக, ஸ்ட்ரெப்டாவிடின்-கார பாஸ்பேடேஸ் இணைப்பை பயோட்டினுடன் பிணைத்தல்.
இந்த வகை கண்டறிதலின் அடிப்படையில், நொதி எதிர்வினை ஏற்பட்ட பிறகு மாதிரிகளில் உள்ள ஒளியியல் அடர்த்தியைப் படிப்பதன் விளைவாக PCR முடிவுகளைக் கண்டறிதல் தானாகவே மேற்கொள்ளப்படும் PCR பகுப்பாய்விகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன.
இந்த முறைகளின் தீமைகளில், டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளின் மிகக் குறுகிய துண்டுகளால் ஆய்வகத்திற்குள் மாசுபடுவதற்கான சாத்தியக்கூறு அடங்கும். இந்த மூலக்கூறுகள் புதிதாக சோதிக்கப்பட்ட மாதிரிகளில் நுழையும்போது, அவை PCR க்கான அணியாக மாறி தவறான நேர்மறையான முடிவுகளுக்கு வழிவகுக்கும்.
இது சம்பந்தமாக, தவறான நேர்மறையான முடிவுகளைத் தடுக்க, அறைகளைப் பிரித்து தனிமைப்படுத்துவதற்கு கடுமையான விதிகள் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டுள்ளன: உயிரியல் மாதிரிகளிலிருந்து டிஎன்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கு; சுத்தமான மண்டலத்திலிருந்து முடிவுகளைக் கண்டறிவதற்கான அறைகள் (எலக்ட்ரோபோரேசிஸ்). இந்த அறைகள் சாத்தியமான மாசுபாட்டின் மண்டலத்தைக் குறிக்கின்றன. மற்றொரு தனிமைப்படுத்தப்பட்ட மண்டலம் என்பது PCR க்கான எதிர்வினை கலவையுடன் சோதனைக் குழாய்களில் ஆய்வு செய்யப்பட்ட டிஎன்ஏ மாதிரிகளை அறிமுகப்படுத்துவதற்கான ஒரு சுத்தமான அறையாகும். இறுதியாக, முக்கிய சாதனம் - டிஎன்ஏ பெருக்கி - ஒரு தனி, ஒருவேளை அலுவலக, அறைக்கு எடுத்துச் செல்லப்பட வேண்டும் என்று கருதப்படுகிறது.
முந்தைய எதிர்வினைகளின் தயாரிப்புகளால் மாசுபடுவதைத் தடுக்க - ஆம்பிளிகான்கள், சில PCR சோதனை அமைப்புகளில் டிஆக்ஸிநியூக்ளியோசைடு தைமிடின் பதிலாக டிஆக்ஸிநியூக்ளியோசைடு யூரிடைன் உள்ளது, இது இன் விட்ரோ சங்கிலித் தொகுப்பின் போது தொடர்புடைய நிலையில் கட்டமைக்கப்படுகிறது, அதாவது பூர்வீக டிஎன்ஏவில் இருக்கும் நைட்ரஜன் அடிப்படை தைமைன் யூராசிலால் மாற்றப்படுகிறது. பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட பொருளின் எதிர்வினை கலவையில் சேர்க்கப்படும் யுரேசில் டிஎன்ஏ கிளைகோசைலேஸ், டிஆக்ஸியூரிடினுடன் மாசுபடுத்தும் துண்டுகளை மட்டுமே அழிக்கிறது, ஆனால் டிஆக்ஸிதைமிடின் கொண்ட பூர்வீக பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட டிஎன்ஏவை அல்ல. 94 o C இல் அடுத்தடுத்த வெப்பம் இந்த நொதியை செயலிழக்கச் செய்கிறது மற்றும் PCR இல் பெருக்கத்தில் தலையிடாது.
RRNA இன் சமவெப்ப பெருக்கத்தை அடிப்படையாகக் கொண்ட ஒரு சோதனை அமைப்பு உள்ளது, இதற்காக முதலில் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளின் தொகுப்பு செய்யப்படுகிறது. இவை ஆர்என்ஏ மூலக்கூறுகளின் அடுத்தடுத்த தொகுப்புக்கான அணியாகும். எதிர்வினை குழாய் கரைசலில் கலப்பினமாக்கலின் போது அக்ரிடின்-படிந்த டிஎன்ஏ ஆய்வைப் பயன்படுத்தி ஆர்என்ஏ ஆம்பிளிகான்கள் கண்டறியப்படுகின்றன. இந்த முறை, அதிக உணர்திறனுடன் கூடுதலாக, ஒரு குழாயில் பகுப்பாய்வை நடத்துவதன் நன்மையைக் கொண்டுள்ளது, இது மாசுபாட்டைத் தடுக்கிறது. ஆசிரியர்களின் கூற்றுப்படி, சுவாச மாதிரிகளில் இந்த முறையின் உணர்திறன் 99-100% குறிப்பிட்ட தன்மையுடன் 90% ஐ அடைகிறது.
நிகழ்நேர PCR-இல் புதிய கண்டறிதல் முறைகள் செயல்படுத்தப்படுகின்றன. இந்த முறைகள் முதன்மையாக PCR மற்றும் அதன் முடிவுகளைக் கண்டறிதல் ஆகியவை ஒரே நேரத்தில் ஒரு மூடிய சோதனைக் குழாயில் மேற்கொள்ளப்படுவதில் வேறுபடுகின்றன. இது பகுப்பாய்வு முறையை தொழில்நுட்ப ரீதியாக எளிதாக்குவது மட்டுமல்லாமல், முந்தைய PCR தயாரிப்புகளால் ஆய்வக வளாகங்கள் மற்றும் மாதிரிகள் மாசுபடுவதைத் தடுக்கிறது.
நிகழ்நேர PCR இல், PCR இன் போது பெருக்கப்பட்ட ஒரு குறிப்பிட்ட DNA துண்டுடன் கூடிய ஃப்ளோரோஜெனிக் DNA ஆய்வின் கலப்பினத்திலிருந்து எழும் ஃப்ளோரசன்ஸ் மூலம் முடிவுகள் கண்டறியப்படுகின்றன. ஃப்ளோரோஜெனிக் DNA ஆய்வுகளின் அமைப்பு, ஒரு நொதி வினையின் விளைவாக ஃப்ளோரசன்ட் மார்க்கர் வெளியிடப்படும் அல்லது PCR இன் போது பெருக்கப்பட்ட விரும்பிய DNA மூலக்கூறுடன் குறிப்பிட்ட கலப்பினத்தில் மட்டுமே ஃப்ளோரசன்ஸ் தணிப்பான் மூலக்கூறிலிருந்து தன்னைத் தூர விலக்கிக் கொள்ளும் வகையில் கட்டமைக்கப்பட்டுள்ளது. ஆய்வுடன் கலப்பினப்படுத்தப்பட்ட மூலக்கூறுகளின் எண்ணிக்கை அதிகரிக்கும் போது, கண்டறியக்கூடிய அளவிற்கு ஃப்ளோரசன்ஸின் அதிகரிப்பு பெருக்கப்பட்ட தயாரிப்பின் மூலக்கூறுகளின் எண்ணிக்கைக்கு விகிதாசாரமாகும். ஒவ்வொரு PCR சுழற்சியிலும் DNA துண்டு மூலக்கூறுகளின் எண்ணிக்கை இரட்டிப்பாக்கப்படுவதால், ஃப்ளோரசன்ஸ் கண்டறியப்பட்டு அதிகரிக்கும் சுழற்சி எண் அசல் மாதிரியில் உள்ள DNA மூலக்கூறுகளின் எண்ணிக்கைக்கு நேர்மாறான விகிதாசாரமாகும். காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியம் DNA இன் தொடர்புடைய துண்டின் மூலக்கூறுகளின் பல அறியப்பட்ட செறிவுகள் ஒரு அளவுத்திருத்தமாக எதிர்வினையில் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டால், ஆய்வு செய்யப்படும் பொருளில் உள்ள DNA மரபணுக்களின் எண்ணிக்கையை கணினி நிரலைப் பயன்படுத்தி கணக்கிட முடியும்.
ஒவ்வொரு நிலையான மாதிரியும் நகலெடுக்கப்படுகிறது. கண்டறியக்கூடிய ஒளிரும் தன்மையின் தொடக்கத்திற்கும் வளர்ச்சிக்கும் தேவையான குறைந்தபட்ச PCR சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கையே அளவுகோல் ஆகும். அப்சிஸ்ஸா அச்சு என்பது சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கை; ஆர்டினேட் அச்சு என்பது ஒளிரும் மதிப்பு. டிஎன்ஏ செறிவுகள் ஒளிரும் தன்மை தோன்றுவதற்குத் தேவையான சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கைக்கு நேர்மாறான விகிதாசாரமாகும். வலது நெடுவரிசையில் உள்ள சாளரங்கள் (21-32) தொடர்புடைய செறிவுகளுக்கான சுழற்சி எண்களைக் காட்டுகின்றன. டிஎன்ஏ துண்டுகள் 10 2 -10 6 மில்லியின் 10 மடங்கு செறிவுகளுக்கு இடையிலான வேறுபாடுகள் 3.2-3.4 சுழற்சிகள். இரண்டு நோயாளிகளுக்கு, IS6110 துண்டுகளின் செறிவுகள் சுமார் 10 3 /ml மற்றும் 10 4 /ml ஆகும். மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் மரபணுவில் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட துண்டுகளின் மறுநிகழ்வுகளின் எண்ணிக்கையை (6-20) கணக்கில் எடுத்துக்கொண்டால், மருத்துவ மாதிரிகளில் மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் எண்ணிக்கை முறையே 100 மற்றும் 1000 செல்கள் ஆகும்.
காசநோய் நோயறிதலில் PCR இன் பயன்பாடு
காசநோயை விரைவாகக் கண்டறிவதற்கு PCR முறை மிகப் பெரிய அளவில் பயன்படுத்தப்படுகிறது - மருத்துவ மாதிரிகளில் மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயைக் கண்டறிதல்: சளி, மூச்சுக்குழாய் கழுவுதல், ப்ளூரல் எக்ஸுடேட், சிறுநீர், செரிப்ரோஸ்பைனல் திரவம், ஆஸ்டியோலிசிஸ் பஞ்சர்கள், பெண் பிறப்புறுப்புப் பாதையின் ஆஸ்பிரேட்டுகள் மற்றும் பல்வேறு பயாப்ஸிகள். ஹாலந்தில் நுரையீரல் காசநோய் உறுதிப்படுத்தப்பட்ட 340 நோயாளிகளிடமிருந்து சுமார் 500 மாதிரிகள் சளி மற்றும் மூச்சுக்குழாய் கழுவுதல் ஆகியவற்றில் நடத்தப்பட்ட ஆய்வில், PCR, கலாச்சாரம் மற்றும் ஸ்மியர் நுண்ணோக்கி முறைகளின் ஒப்பீட்டு உணர்திறன் ஆய்வு செய்யப்பட்டது. பகுப்பாய்வின் உணர்திறன் முறையே 92.6, 88.9 மற்றும் 52.4% ஆகும். அனைத்து முறைகளின் தனித்தன்மையும் சுமார் 99% ஆகும்.
ஸ்மியர் நுண்ணோக்கி, லோவன்ஸ்டீன்-ஜென்சன் ஊடகத்தில் விதைப்பு, VASTES சோதனை அமைப்பு மற்றும் PCR பகுப்பாய்வு ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயைக் கண்டறிவதன் செயல்திறனை ஒப்பிட்டுப் பார்க்கப்பட்டது. PCR 74.4% உணர்திறனையும், நுண்ணோக்கி - 33.8%, திட ஊடகத்தில் விதைப்பு - 48.9% மற்றும் VASTES - 55.8% ஐயும் நிரூபித்தது. லோவன்ஸ்டீன்-ஜென்சன் ஊடகத்தில் விதைப்பதற்கான சராசரி கண்டறிதல் நேரம் 24 நாட்கள். VASTES - 13 நாட்கள், PCR - 1 நாள்.
காசநோய் சிகிச்சையின் செயல்திறனைக் கண்காணிப்பதற்கான ஒரு உணர்திறன் மற்றும் விரைவான முறையாக PCR ஐப் பயன்படுத்துவதற்கான சாத்தியக்கூறுகளும் விவாதிக்கப்படுகின்றன.
பயனுள்ள கீமோதெரபி மூலம் PCR முறை மூலம் மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோய் டிஎன்ஏவைக் கண்டறிவது நீண்ட காலத்திற்கு தீர்மானிக்கப்படுகிறது - ஃப்ளோரசன்ட் நுண்ணோக்கியால் தீர்மானிக்கப்படும் பாக்டீரியா வெளியேற்றத்துடன் ஒப்பிடும்போது சராசரியாக 1.7 மாதங்கள், மற்றும் பாக்டீரியாவியல் பரிசோதனையுடன் ஒப்பிடும்போது 2.5 மாதங்கள்.
காசநோயின் எக்ஸ்ட்ராபல்மோனரி வடிவங்களைக் கண்டறிதல்
ஒரு உணர்திறன் முறையாக PCR இன் முக்கியத்துவம், குறிப்பாக நுரையீரல் வடிவங்களுக்கு மிகச் சிறந்தது, ஏனெனில் இந்த வடிவங்களில்தான் மருத்துவ மற்றும் கதிரியக்க முறைகள் மற்றும் கண்டறியும் பொருட்களில் மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயை தீர்மானிப்பதற்கான பாரம்பரிய பாக்டீரியாவியல் முறைகள் பயனற்றவை.
சிறுநீர் மாதிரிகளை ஆய்வு செய்தபோது, PCR பகுப்பாய்வு முடிவுகள் சிறுநீர் மண்டலத்தில் செயலில் உள்ள காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட 17 நோயாளிகளில் 16 பேருக்கு நேர்மறையாகவும், செயலற்ற சிறுநீரக காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட 4 நோயாளிகளிலும், சிறுநீர் மண்டலத்தில் காசநோய் இல்லாத 39 நோயாளிகளிலும் எதிர்மறையாகவும் இருந்தன.
அறியப்படாத தோற்றம் கொண்ட காய்ச்சல் உள்ள, காசநோய் தன்மை கொண்ட, நோயின் தன்மை இருப்பதாக சந்தேகிக்கப்படும் நோயாளிகளுக்கு எலும்பு மஜ்ஜை ஆஸ்பிரேட்டுகளின் ஆய்வில் PCR பகுப்பாய்வின் செயல்திறன் நிரூபிக்கப்பட்டது. குழந்தைகளில் காசநோய் நிணநீர் அழற்சியைக் கண்டறிவதற்கு, காசநோய் நிணநீர் அழற்சி இருப்பதாக சந்தேகிக்கப்படும் 67 குழந்தைகளின் 102 பஞ்சர் ஆஸ்பிரேட்டுகள் மற்றும் பயாப்ஸி மாதிரிகள் ஆய்வு செய்யப்பட்டன. நேர்மறையான முடிவுகள் பெறப்பட்டன: நிகழ்நேர PCR மூலம் - 71.6%, ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி - 46.3%, கலாச்சார ஆய்வு - 41.8%. பூனை-கீறல் நோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளில் 50 நிணநீர் முனை பயாப்ஸிகளின் ஆய்வில், அனைத்து முடிவுகளும் எதிர்மறையாக இருந்தன. இவ்வாறு, PCR பகுப்பாய்வின் 100% தனித்தன்மை நிரூபிக்கப்பட்டது. அதே வேலையில், நிணநீர் முனைகளின் பஞ்சர் பயாப்ஸியில் M. ஏவியத்தைக் கண்டறியும் சாத்தியம் காட்டப்பட்டது.
கருவுறாமையில் பெண் பிறப்புறுப்பு காசநோயைக் கண்டறிவது மிகவும் கடினமான நோயறிதல் சிக்கல்களில் ஒன்றாக அறியப்படுகிறது. சந்தேகிக்கப்படும் காசநோய் உள்ள 25 நோயாளிகளில் 14 (56%) பேரில் எண்டோமெட்ரியல் பயாப்ஸிகள், எண்டோமெட்ரியல் ஆஸ்பிரேட்டுகள் மற்றும் டக்ளஸ் பை திரவ மாதிரிகள் ஆகியவற்றின் PCR ஆய்வுகளில் நேர்மறையான முடிவுகள் பெறப்பட்டன. ஸ்மியர் நுண்ணோக்கி மற்றும் கலாச்சார ஆய்வுகள் முறையே 1 மற்றும் 2 நேர்மறையான முடிவுகளை அளித்தன. இந்த நிகழ்வுகளும் PCR- நேர்மறையாக இருந்தன. பெரும்பாலான PCR- நேர்மறை முடிவுகள் ஹிஸ்டாலஜிக்கல் பரிசோதனையின் படி காசநோயின் சிறப்பியல்பு அம்சங்களைக் கொண்ட வழக்குகளில் இருந்தன; லேபராஸ்கோபியின் படி சந்தேகிக்கப்படும் காசநோய் உள்ள வழக்குகளில் குறைந்த எண்ணிக்கையில் இருந்தன. காசநோய்க்கான லேபராஸ்கோபிக் தரவு இல்லாத நிலையில் ஒரே ஒரு நேர்மறை PCR முடிவு மட்டுமே பெறப்பட்டது.
நுரையீரல் காசநோயின் எக்ஸ்ட்ராபல்மோனரி வடிவங்களைக் கண்டறியும் போது, PCR முறையைப் பயன்படுத்தி இரத்த மாதிரிகளை ஆய்வு செய்யும் போது நோய்க்கிருமியைக் கண்டறிவதற்கான சாத்தியக்கூறு குறித்து மருத்துவர்களுக்கு பெரும்பாலும் ஒரு கேள்வி இருக்கும். இரத்த மாதிரிகளிலிருந்து மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோய் DNA ஐக் கண்டறிவது HIV நோய்த்தொற்றின் மேம்பட்ட வடிவங்களில் சாத்தியமாகும் என்பதை இலக்கியத் தரவுகள் குறிப்பிடுகின்றன. சிறுநீரக மாற்று அறுவை சிகிச்சை மற்றும் நோயெதிர்ப்புத் தடுப்பு நோயாளிகளுக்கு பல்வேறு உறுப்புகளின் பொதுவான காசநோயில் மட்டுமே மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோய் DNA கண்டறியப்பட்டது.
[ 59 ], [ 60 ], [ 61 ], [ 62 ], [ 63 ]
மைக்கோபாக்டீரியாவின் இனங்கள் அடையாளம் காணல்
காசநோய் சிக்கலான மைக்கோபாக்டீரியாக்கள் மற்றும் சில வகையான காசநோய் அல்லாத மைக்கோபாக்டீரியாக்கள் அவற்றின் முதன்மை வளர்ச்சியைப் பெற்ற பிறகு விரைவாக அடையாளம் காண PCR முறை மிகவும் பயனுள்ளதாக இருக்கும். இந்த வழக்கில், PCR இன் பயன்பாடு நேர்மறையான முடிவை அடுத்தடுத்த கலாச்சார அடையாளம் காண தேவையான 7-10 நாட்களை மிச்சப்படுத்தும். PCR ஆய்வு தொழில்நுட்ப ரீதியாக மிகவும் எளிமையானது, ஏனெனில் அதிக உணர்திறனை அடைய மருத்துவப் பொருளின் சிக்கலான மாதிரி தயாரிப்பு தேவையில்லை. அத்தகைய சோதனை முறையில் 80 நேர்மறை கலாச்சாரங்களை ஆராயும்போது (MB BacT. by Organon), அனைத்து நேர்மறை PCR பகுப்பாய்வு முடிவுகளும் கண்டிப்பாக குறிப்பிட்டவை மற்றும் 1 நாளுக்குள் மேற்கொள்ளப்பட்டன. கலாச்சாரத்தில் பெறப்படும்போது மற்ற வகை மைக்கோபாக்டீரியாக்களை அடையாளம் காண, நோய்க்கிருமி டிஎன்ஏ அக்ரிடைனுடன் பெயரிடப்பட்ட குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ ஆய்வுகள் மூலம் கலப்பினமாக்கப்படுகிறது, மேலும் கெமிலுமினென்சென்ஸின் தோற்றத்தால் அல்லது கலப்பினத்திற்குப் பிறகு காட்சி மதிப்பீட்டைக் கொண்ட நைட்ரோசெல்லுலோஸ் பட்டைகளில் விகாரங்கள் கண்டறியப்படுகின்றன. இந்த கிட் குறிப்பிட்ட எண்ணிக்கையிலான இனங்களை அடையாளம் காட்டுகிறது: மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோய் சிக்கலானது, எம். ஏவியம், எம். ஏவியம் சிக்கலானது, எம். கன்சாசி மற்றும் எம். கோர்டோனே.
A. Telenti மற்றும் பலர், PCR அடிப்படையிலான மருத்துவ ரீதியாக முக்கியமான மைக்கோபாக்டீரியாவின் இனங்களை அடையாளம் காணவும், அதைத் தொடர்ந்து இரண்டு கட்டுப்பாட்டு நொதிகளுடன் (குறிப்பிட்ட புள்ளிகளில் ஒரு DNA மூலக்கூறை வெட்டும் திறன் கொண்ட நொதிகள்) சிகிச்சை செய்யவும் ஒப்பீட்டளவில் எளிமையான மற்றும் மலிவான முறையை உருவாக்கினர். இந்த வழக்கில், வெப்ப அதிர்ச்சி புரதத்தை (65 kDa) குறியீடாக்கும் ஒரு DNA துண்டு பெருக்கப்படுகிறது, அதன் பிறகு PCR இல் பெறப்பட்ட DNA துண்டு, 439 நியூக்ளியோடைடு ஜோடிகள் அளவில், இரண்டு நொதிகளுடன் தனித்தனியாக சிகிச்சையளிக்கப்படுகிறது - Bste II மற்றும் Нае III. பின்னர், அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸைப் பயன்படுத்தி, பெறப்பட்ட இரண்டு தயாரிப்புகளும் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டு, 100 முதல் 1000 நியூக்ளியோடைடு ஜோடிகள் நீளம் கொண்ட நிலையான DNA துண்டுகள் (மூலக்கூறு DNA குறிப்பான்கள்) தொகுப்பைப் பயன்படுத்தி அவற்றின் அளவுகளை (நியூக்ளியோடைடு ஜோடிகளின் எண்ணிக்கை) தீர்மானிக்கின்றன. வரையறுக்கப்பட்ட ஒவ்வொரு இனத்திலும் (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M.fortuitum) ஒவ்வொரு கட்டுப்பாட்டு நொதிக்கும் வெவ்வேறு அளவுகளில் 2 அல்லது 3 DNA துண்டுகள் காணப்படுகின்றன. வெவ்வேறு அளவுகளில் உருவாகும் டிஎன்ஏ துண்டுகளின் கலவையானது இந்த இனங்களை ஒன்றுக்கொன்று வேறுபடுத்தி அறிய அனுமதிக்கிறது.
ஒரே ஆய்வில் 100க்கும் மேற்பட்ட மைக்கோபாக்டீரியா இனங்களை அடையாளம் காண உதவும் உயிரியல் டிஎன்ஏ நுண்அணிகளுக்கான தொழில்நுட்பம் உருவாக்கப்பட்டு வருகிறது.
16S rRNA இன் மாறி பகுதியின் PCR பெருக்கத்தைப் பயன்படுத்தியும் இனங்கள் அடையாளம் காணப்படலாம், அதைத் தொடர்ந்து தொடர்புடைய முதன்மை அமைப்புடன் ஒப்பிடுகையில் ஆம்பிளிகான்களை வரிசைப்படுத்தலாம், இது 40 க்கும் மேற்பட்ட மைக்கோபாக்டீரியா இனங்களை அடையாளம் காண அனுமதிக்கிறது.
காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியம் வளாகத்திற்குள் உள்ள இனங்களை அடையாளம் காணவும் PCR பயன்படுத்தப்படலாம், இதில் M. bovis மற்றும் M. bovis BCG ஆகியவற்றுக்கு இடையேயான வேறுபாடு அடங்கும். RD1, RD9 மற்றும் RD10 மரபணுப் பகுதிகளில் சில மரபணுக்களின் இருப்பு அல்லது இல்லாமையை பகுப்பாய்வு செய்வதன் மூலம் இது செய்யப்படுகிறது. M. bovis BCG இல் RD1 இல்லை, ஆனால் M. bovis உள்ளிட்ட வைரஸ் இனங்களில் உள்ளது.
PCR ஐப் பயன்படுத்தி மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் மருந்து உணர்திறனைத் தீர்மானித்தல்
மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் மருந்து உணர்திறன் அல்லது எதிர்ப்பை தீர்மானிப்பதற்கான மூலக்கூறு மரபணு முறைகளின் பணிகள், அறியப்பட்ட மரபணுக்களின் சில நியூக்ளியோடைடு வரிசைகளில் பிறழ்வுகளை அடையாளம் காண்பதாக குறைக்கப்படுகின்றன. முக்கிய முறைகள் பெருக்கத்திற்குப் பிறகு இந்த வரிசைகளின் நேரடி வாசிப்பு (வரிசைப்படுத்துதல்) அல்லது டிஎன்ஏ ஆய்வுகளுடன் பிசிஆரின் போது பெருக்கப்பட்ட பயோட்டின்-லேபிளிடப்பட்ட டிஎன்ஏ துண்டுகளின் கலப்பினத்தை அடிப்படையாகக் கொண்டவை. இரண்டு விருப்பங்களும் நியூக்ளியோடைடு வரிசைகளில் மாற்றுகளை அடையாளம் காண்பதை உள்ளடக்கியது, அவை டிஎன்ஏ ஆய்வுகளைப் பயன்படுத்தும் போது, ஒரு நொதி கான்ஜுகேட் (ஸ்ட்ரெப்டாவிடின்-அல்கலைன் பாஸ்பேடேஸ்) - LIPA-Rif-TB முறையைப் பயன்படுத்தி நைட்ரோசெல்லுலோஸ் மென்படலத்தில் இல்லாத அல்லது முழுமையற்ற கலப்பினத்திற்கு வழிவகுக்கும்.
மருந்து உணர்திறன் அல்லது எதிர்ப்புக்கு காரணமான PCR-பெருக்கப்பட்ட மரபணு பகுதிகளில் அறியப்பட்ட பிறழ்வுகளுக்கு துணைபுரியும் நுண் பகுதிகளில் உள்ள உள்ளூர் நிலையான DNA ஆய்வுகளில் ஒளிர்வை அளவிடும் முறை மைக்ரோபயோசிப்ஸ் முறை என்று அழைக்கப்படுகிறது. இந்த ஆய்வை நடத்துவதற்கான அடிப்படை வழிமுறை பின்வருமாறு. மருத்துவ மாதிரி அல்லது மைக்கோபாக்டீரியல் கலாச்சாரத்திலிருந்து DNA தனிமைப்படுத்தப்பட்ட பிறகு, ரிஃபாம்பிசினுக்கு மருந்து உணர்திறனுக்குப் பொறுப்பான groB மரபணுவின் தொடர்புடைய துண்டுகளை அல்லது ஐசோனியாசிட்டுக்கு உணர்திறனுக்குப் பொறுப்பான மைக்கோபாக்டீரியல் புரதங்களை குறியாக்கம் செய்யும் katG மற்றும் inhA மரபணுக்களை பெருக்க PCR செய்யப்பட வேண்டும். PCR முடிவுகள் அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸைப் பயன்படுத்தி மதிப்பிடப்படுகின்றன, இது விரும்பிய நீளத்தின் தொடர்புடைய DNA துண்டுகளின் ரசீதை உறுதிப்படுத்துகிறது. பின்னர், DNA இல் ஒரு ஒளிரும் லேபிளை அறிமுகப்படுத்த PCR இன் 2வது சுற்று செய்யப்படுகிறது. PCR முடிவுகள் மீண்டும் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் உறுதிப்படுத்தப்படுகின்றன. இதற்குப் பிறகு, கலப்பினமாக்கல் (இரவு முழுவதும் அடைகாத்தல்) மேற்கொள்ளப்படுகிறது, பின்னர் பெறப்பட்ட பொருளை ஒரு பயோசிப்பில் கழுவுதல் செய்யப்படுகிறது, இது ஒரு சிறிய கண்ணாடித் தட்டில் பொருத்தப்பட்ட அதிக எண்ணிக்கையிலான குறுகிய டிஎன்ஏ சங்கிலிகள் (ஆய்வுகள்), சாத்தியமான பிறழ்வுகளின் புள்ளிகளில் மருந்து உணர்திறன் வகை காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியாவின் நியூக்ளியோடைடு வரிசைகளுக்கு நிரப்புகிறது. அத்துடன் மருந்து எதிர்ப்பிற்கு காரணமான பிறழ்வு வரிசைகளுக்கும். தட்டில் உள்ள டிஎன்ஏ ஆய்வுகளின் இருப்பிடம் கண்டிப்பாக வரையறுக்கப்பட்டுள்ளது, மேலும் ஒரு சிறப்பு வாசிப்பு சாதனத்தைப் பயன்படுத்தி முடிவைத் தீர்மானிக்க கலப்பினத்தின் போது காணப்பட்ட ஒளிரும் அளவு நிறுவப்பட்டுள்ளது. இது சம்பந்தமாக, பகுப்பாய்வின் முடிவுகள் ஒரு சிறப்பு கணினி நிரலைப் பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்படுகின்றன.
சமீபத்திய ஆண்டுகளில், மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் மருந்து உணர்திறனை தீர்மானிப்பதற்கான மாற்று முறைகள் நிகழ்நேர PCR தொழில்நுட்பத்தின் அடிப்படையில் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன, இது இந்த ஆய்வுகளை மூடிய சோதனைக் குழாய் முறையில் மேற்கொள்ள அனுமதிக்கிறது.
படம் 13-13, நிகழ்நேர PCR ஐப் பயன்படுத்தி ரிஃபாம்பிசினுக்கு மருந்து எதிர்ப்பை தீர்மானிப்பதில் மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் மருத்துவ கலாச்சாரங்களின் பகுப்பாய்வின் முடிவைக் காட்டுகிறது: 218 - கட்டுப்பாட்டு மாதிரி (ரிஃபாம்பிசினுக்கு உணர்திறன்); 93 - Ser-Trp TCG-TGG பிறழ்வுக்கான நேர்மறை கட்டுப்பாடு; 4482 - Ser-Leu TCG-TTG பிறழ்வுக்கான நேர்மறை கட்டுப்பாடு; 162-322 - சோதனை மாதிரிகள். 4 சேனல்களுக்கான பெருக்கத்தின் இயக்க வளைவுகளைக் கணக்கிடுவதன் முடிவு: சேனல் 1: 393 - Ser-Trp TCG-TGG பிறழ்வுக்கான நேர்மறை கட்டுப்பாடு; சேனல் 2: 4482 - Ser-Leu TCG-TTG பிறழ்வுக்கான நேர்மறை கட்டுப்பாடு; 162, 163, 172, 295 - சோதனை மாதிரிகள்; சேனல் 4: பரிசோதனையில் பங்கேற்கும் அனைத்து மாதிரிகளின் பெருக்கத்தின் இயக்க வளைவுகள். பெருக்க வினையின் நேர்மறை கட்டுப்பாடு. முடிவுகள்: பகுப்பாய்வு ரிஃபாம்பிசினுக்கு எதிர்ப்பை நிர்ணயிக்கும் பின்வரும் பிறழ்வுகளை வெளிப்படுத்தியது: 162,163,172,295 மாதிரிகளில் - செர்-லியூ TCG-TTG. அதே கொள்கை ஐசோனியாசிட்டுக்கு மருந்து எதிர்ப்பை தீர்மானிக்க katG மற்றும் inhA மரபணுக்களால் பயன்படுத்தப்பட்டது, அவை மிகவும் அடிக்கடி ஏற்படும் பிறழ்வுகளை தீர்மானிக்கின்றன.
[ 64 ], [ 65 ], [ 66 ], [ 67 ], [ 68 ], [ 69 ]
மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் திரிபு அடையாளம் காணல்
மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயின் திரிபு அடையாளம் காண மிகவும் ஆய்வு செய்யப்பட்ட முறை கட்டுப்பாடு துண்டு நீள பாலிமார்பிசம் (RFLP) எனப்படும் தொழில்நுட்பமாகும், இது Pvu II என்ற நொதியால் மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோய் DNA இன் துண்டு துண்டாக (கட்டுப்படுத்தல்) மற்றும் அதன் மீண்டும் மீண்டும் வரும் உறுப்பு IS6110 இன் DNA இல் சில குறிப்பிட்ட வரிசைகளுடன் பெறப்பட்ட துண்டுகளின் கலப்பினத்தை அடிப்படையாகக் கொண்டது. IS6110 மீண்டும் மீண்டும் வருதல்களின் வெவ்வேறு எண்ணிக்கை மற்றும் DNA இல் அவற்றின் இருப்பிடம், அத்துடன் கட்டுப்பாடு நொதியின் (கட்டுப்பாடு தளங்கள்) மற்றும் IS6110 தனிமத்தின் சில தாக்குதல் புள்ளிகளுக்கு இடையிலான தூரங்களின் பன்முகத்தன்மை காரணமாக குறிப்பிட்ட இடைவெளி உணரப்படுகிறது. இந்த தொழில்நுட்பம் மிகவும் சிக்கலானது மற்றும் உழைப்பு மிகுந்தது. காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியம் கலாச்சாரத்திலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட டிஎன்ஏவை கட்டுப்பாட்டு நொதியுடன் சிகிச்சையளித்த பிறகு, ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் செய்யப்படுகிறது, பின்னர் வெவ்வேறு நீளங்களின் டிஎன்ஏ துண்டுகள் ஒரு நைட்ரோசெல்லுலோஸ் சவ்வுக்கு மாற்றப்பட்டு, IS6110 தனிமத்தின் துண்டுகளுடன் கலப்பினப்படுத்தப்பட்டு, ஒரு நொதி எதிர்வினையைப் பயன்படுத்தி முடிவுகள் கண்டறியப்படுகின்றன. இதன் விளைவாக வரும் குறிப்பிட்ட பட்டை முறை ஒரு குறிப்பிட்ட காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியம் விகாரத்தின் டிஎன்ஏவை வகைப்படுத்துகிறது. கணினி பகுப்பாய்வு, திரிபுகளின் அடையாளம் அல்லது உறவை வெளிப்படுத்துகிறது. RFLP முறை மிகவும் பாகுபாடு காட்டுவதாக இருந்தாலும், அதாவது பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட திரிபுகளில் அதிக எண்ணிக்கையிலான வேறுபாடுகளை வெளிப்படுத்துகிறது, சில திரிபுகளில் காணப்படும் IS6110 மறுநிகழ்வுகளின் சிறிய எண்ணிக்கையில் (5 க்கும் குறைவாக) இது பயனற்றது. திரிபுகளின் RFLP தட்டச்சு முடிவுகளை புள்ளிவிவரங்கள் 13-14 காட்டுகின்றன.
ஒரு மாற்றாக ஸ்போலிகோடைப்பிங் முறை இருக்கலாம் - இடைவெளி டிஎன்ஏ வரிசைகளின் பாலிமார்பிசத்தின் பகுப்பாய்வு - டிஆர் பகுதியின் நேரடி மறுநிகழ்வுகளுக்கு இடையில் இடைநிலை. விகாரங்களின் ஸ்போலிகோடைப்பிங்கை நடத்தும்போது, டிஆர் பகுதியை கட்டுப்படுத்தும் ப்ரைமர்களுடன் பிசிஆர் மேற்கொள்ளப்படுகிறது, அதன் பிறகு வெவ்வேறு நீளங்களின் துண்டுகள் உருவாகின்றன, அவை மாறி இடைநிலை டிஎன்ஏ பகுதிகளுடன் கலப்பினமாகின்றன. டிஆர் பகுதியின் இடைவெளி வரிசைகளின் பகுப்பாய்வு, ஆராய்ச்சியாளர்களின் கூற்றுப்படி, எளிமையானது, அதிக உற்பத்தித் திறன் கொண்டது மற்றும் விகாரங்களின் முதன்மை பரிசோதனை மற்றும் ஆரம்ப தொற்றுநோயியல் பகுப்பாய்விற்கும், மருத்துவப் பொருளை நேரடியாகப் படிப்பதற்கும் ஏற்றது.
வெளிப்படையாக, மிகவும் பயனுள்ள மற்றும் தொழில்நுட்ப ரீதியாக அணுகக்கூடிய முறை VNTR (ஆங்கில வார்த்தைகளின் சுருக்கம்), அல்லது மைக்கோபாக்டீரியம் டியூபர்குலோசிஸின் DNA இல் உள்ள துல்லியமான டேன்டெம் ரிபீட்களின் மாறி எண்ணிக்கையை தீர்மானிக்கும் முறை. இந்த முறை PCR இன் பயன்பாட்டை மட்டுமே அடிப்படையாகக் கொண்டது மற்றும் கூடுதல் கையாளுதல்கள் தேவையில்லை. வெவ்வேறு விகாரங்களிலும் வெவ்வேறு இடங்களிலும் உள்ள டேன்டெம் ரிபீட்களின் எண்ணிக்கை வேறுபட்டிருப்பதால், வெவ்வேறு அளவுகளின் துண்டுகள் தீர்மானிக்கப்பட்டு PCR தயாரிப்புகளின் விளைவாக வரும் எலக்ட்ரோஃபோரிகிராமில் பகுப்பாய்வு செய்யப்படுகின்றன. ஆராய்ச்சியாளர்களின் கூற்றுப்படி, VNTR இன் உதவியுடன், RFLP முறையை விட அதிக அளவு விகாரங்களின் பாகுபாடு அடையப்படுகிறது.
சமீபத்திய ஆண்டுகளில், W-பெய்ஜிங் குடும்பத்தைச் சேர்ந்த (சில நேரங்களில் பெய்ஜிங் திரிபு என்றும் அழைக்கப்படுகிறது) மைக்கோபாக்டீரியம் டியூபர்குலோசிஸின் விகாரங்கள் பரவுவதில் அதிக கவனம் செலுத்தப்பட்டுள்ளது, இவை பெரும்பாலும் மருந்து எதிர்ப்புத் திறன் கொண்டவை.
மூலக்கூறு உயிரியல் ஆராய்ச்சியின் தரத்திற்கான அடிப்படைத் தேவைகள்
[ 70 ], [ 71 ], [ 72 ], [ 73 ]
PCR நடத்துவதற்கான முக்கிய ஒழுங்குமுறை ஆவணங்கள்
ரஷ்ய கூட்டமைப்பின் சுகாதார அமைச்சகத்தின் உத்தரவுகள்: 7.02.2000 இன் எண் 45; 21.03.2003 இன் எண் 109; 21.02.2000 இன் எண் 64. வழிகாட்டுதல்கள்: 1.3.1888-04 "III-IV நோய்க்கிருமி குழுக்களின் நோய்க்கிருமி உயிரியல் முகவர்களால் பாதிக்கப்பட்ட பொருட்களின் PCR ஆராய்ச்சியின் போது பணிகளை ஒழுங்கமைத்தல்"; 1.3.1794-03 "I-II நோய்க்கிருமி குழுக்களின் நுண்ணுயிரிகளால் பாதிக்கப்பட்ட பொருட்களின் PCR ஆராய்ச்சியின் போது பணிகளை ஒழுங்கமைத்தல்". 2003; 3.5.5.1034-01 "PCR முறையுடன் பணிபுரியும் போது I-IV நோய்க்கிருமி குழுக்களின் பாக்டீரியாவால் பாதிக்கப்பட்ட சோதனைப் பொருளை கிருமி நீக்கம் செய்தல்", 2001. காசநோயைக் கண்டறிதல், கண்டறிதல் மற்றும் சிகிச்சையில் நுண்ணுயிரியல் ஆராய்ச்சியின் ஒருங்கிணைந்த முறைகள் குறித்த வழிமுறைகளுக்கான இணைப்பு 11.
ஊழியர்கள்
மூலக்கூறு உயிரியல் ஆய்வுகள் மருத்துவ ஆய்வக நோயறிதல் மருத்துவர்கள், பாக்டீரியாலஜிஸ்டுகள், வைராலஜிஸ்டுகள், மருத்துவ நோயறிதல் ஆய்வக உயிரியலாளர்கள், அத்துடன் நிறுவப்பட்ட முறையில் சிறப்பு மற்றும் மேம்பட்ட பயிற்சி பெற்ற இரண்டாம் நிலை மருத்துவக் கல்வியைக் கொண்ட நிபுணர்களால் மேற்கொள்ளப்படலாம்.
ஆய்வக வளாகத்தின் ஏற்பாடு
பின்வரும் ஆய்வக வசதிகள் தேவை:
- மாதிரி செயலாக்கப் பகுதி - 13.1888-04 வழிமுறை வழிகாட்டுதல்களின்படி, நோய்க்கிருமித்தன்மை குழுக்கள் III-IV இன் தொற்று முகவர்களுடன் பணிபுரிய மாற்றியமைக்கப்பட்ட ஒரு ஆய்வகம்.
- PCR எதிர்வினை கலவைகளைத் தயாரிப்பதற்கான பகுதி என்பது ஒரு ஆய்வக அறையாகும், இது உள் ஆய்வக மாசுபாட்டிலிருந்து பாதுகாப்பை வழங்குகிறது - ஒரு "சுத்தமான" பகுதி.
- • PCR தயாரிப்புகளை பகுப்பாய்வு செய்ய எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் அல்லது கலப்பினமாக்கல் பயன்படுத்தப்பட்டால், பெருக்கக் குழாயிலிருந்து பெருக்கப்பட்ட DNA துண்டுகள் பிரித்தெடுக்கப்பட்டு, அதன்படி, சுற்றுச்சூழலுக்குள் நுழையக்கூடிய ஆய்வக அறை, PCR ஆய்வகங்களுக்கான தேவைகளுக்கு இணங்க (முறை வழிகாட்டுதல்கள் 1.3.1794-03, முறை வழிகாட்டுதல்கள் 1.3.1888-04) முந்தைய பத்திகளில் குறிப்பிடப்பட்டுள்ள அறைகளிலிருந்து முழுமையாக தனிமைப்படுத்தப்பட வேண்டும். எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் பகுதியிலிருந்து மாதிரி செயலாக்க பகுதி மற்றும் "சுத்தமான" பகுதிக்கு எந்தவொரு பணியாளர்கள், உபகரணங்கள், எந்தவொரு பொருட்கள் மற்றும் பொருட்களின் இயக்கம், அத்துடன் காற்றோட்ட அமைப்பு வழியாக அல்லது வரைவுகளின் விளைவாக காற்று பரிமாற்றம் ஆகியவை விலக்கப்பட வேண்டும். PCR தயாரிப்புகளின் ஃப்ளோரிமெட்ரிக் கண்டறிதலுக்கு இந்தப் பகுதி தேவையில்லை.
- முடிவுகளை ஆவணப்படுத்துவதற்கும் செயலாக்குவதற்கும் உள்ள அறையில் கணினிகள் மற்றும் தேவையான அலுவலக உபகரணங்கள் பொருத்தப்பட்டுள்ளன. குழாயைத் திறக்காமலேயே PCR தயாரிப்புகளைக் கண்டறிவதை உறுதி செய்யும் உபகரணங்கள் இந்த அறையில் இருக்கலாம். - நிகழ்நேர PCR-க்கான ஃப்ளோரசன்ட் PCR டிடெக்டர்கள் மற்றும் வெப்ப சுழற்சிகள்.
சளியின் முதன்மை செயலாக்கத்திற்கான சுகாதார மற்றும் தொற்றுநோயியல் தேவைகள், மைக்கோபாக்டீரியம் காசநோயுடன் பணிபுரிவதற்கான நிலையான நுண்ணுயிரியல் தேவைகளைப் போலவே இருக்கும்.
[ 77 ], [ 78 ], [ 79 ], [ 80 ]
PCR நோயறிதலுக்கான ஆய்வக உபகரணங்களின் முழுமையான தொகுப்பு
ஆய்வகப் பெட்டியில் பின்வரும் அறைகளுக்கான உபகரணங்கள் உள்ளன.
- மாதிரி தயாரிப்பு அறை, பின்வரும் உபகரணங்களைக் கொண்டுள்ளது: பாதுகாப்பு வகுப்பு II "SP-1.2" இன் லேமினார் ஃப்ளோ ஹூட்: எப்பென்டார்ஃப் சோதனைக் குழாய்களுக்கான சூடான மூடியுடன் கூடிய திட-நிலை தெர்மோஸ்டாட்; 13,000 rpm இல் மைக்ரோசென்ட்ரிஃபியூஜ்; மையவிலக்கு ("வோர்டெக்ஸ்"); -20 ° C முதல் +10 ° C வரை வெப்பநிலை வரம்பைக் கொண்ட குளிர்சாதன பெட்டி; "புரோலைன்" தொடரின் மாறி அளவு பைப்பெட்டுகள்; ஒரு ட்ராப் பிளாஸ்க் OM-1 உடன் பம்ப்; பைப்பெட் ரேக்; பணி நிலைய ரேக் 200x0.5 மில்லி; பணி நிலைய ரேக் 50x1.5 மில்லி; சோதனைக் குழாய்களை சேமிப்பதற்கான ரேக்குகள் 80x1.5 மில்லி;
- எதிர்வினை கலவை தயாரிப்பு அறை: பாதுகாப்பு அறை PCR பெட்டி ("லேமினார்-C. 110 செ.மீ); மையவிலக்கு "சுழல்"; "புரோலைன்" தொடரின் மாறி அளவு பைப்பெட்டுகள்; பைப்பெட் ரேக்; பணிநிலைய ரேக் 200x0.2 மில்லி; சோதனைக் குழாய்களை சேமிப்பதற்கான ரேக்குகள் 80x1.5 மில்லி; -20 ° C முதல் +10 ° C வரை வெப்பநிலை வரம்பைக் கொண்ட குளிர்சாதன பெட்டி;
- மின்னாற்பகுப்பு அறை: கிடைமட்ட மின்னாற்பகுப்பு அறை; சக்தி மூலம்; டிரான்சில்லுமினேட்டர்;
- கணினி மற்றும் மென்பொருளுடன் கூடிய டிஎன்ஏ பெருக்கி அல்லது நியூக்ளிக் அமில பகுப்பாய்வி (நிகழ்நேர PCR); கிடைக்கக்கூடிய எந்த அறையிலும் வைக்கலாம். நிகழ்நேர PCR தொழில்நுட்பம் பயன்படுத்தப்பட்டால், எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் அறை தேவையில்லை.
[ 81 ], [ 82 ], [ 83 ], [ 84 ]
வெளிப்புற தரக் கட்டுப்பாடு
புறநிலை ரீதியாக நம்பகமான முடிவுகளைப் பெறுவதை உறுதிசெய்ய, ஆய்வகங்கள் ஆய்வக ஆராய்ச்சியின் தரத்தின் வெளிப்புற மதிப்பீட்டு அமைப்பில் பங்கேற்க வேண்டும்.
தரக் கட்டுப்பாட்டு அமைப்பில் பங்கேற்பாளர்கள் பெறுவது: பாக்டீரியா செல்களின் லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட இடைநீக்கங்களுடன் கூடிய 12 ஆம்பூல்கள், அவற்றில் இரண்டில் ஈ. கோலை உள்ளது, 10 2 /ml செறிவில் காசநோய் மைக்கோபாக்டீரியா (வைரஸ் ஸ்ட்ரெய்ன்) கொண்ட 3 ஆம்பூல்கள்; 104 /ml செறிவில் ஒத்த திரிபு செல்கள் கொண்ட 3 ஆம்பூல்கள்; 10 5 /ml செறிவில் காசநோய் இல்லாத மைக்கோபாக்டீரியா M. avium-intracellulare மற்றும் M. kansasii உடன் தலா 2 ஆம்பூல்கள்.
வெளிப்புற தர மதிப்பீட்டிற்காக அனுப்பப்படும் சோதனைகள், இந்தத் துறையில் விரிவான அனுபவமுள்ள இரண்டு சுயாதீன ஆய்வகங்களில் முன்கூட்டியே சோதிக்கப்படுகின்றன.